La Diagnosi di Laboratorio delle Malattie da Protozoi - tutte mappe

1. Immunofluorescenza Indiretta (IFI)
Prelievo in provetta da sierologia
Il siero del campione viene scomplementato a 56°c per 30’
Al momento dell’esecuzione del test il vetrino con l’antigene viene tolto dal congelatore
e tenuto per 15’ a temperatura ambiente, lavato in PBS 7,2 ed asciugato a temperatura
ambiente.
• Si preparano diluizioni scalari, a raddoppio, del siero in esame e del controllo
positivo a partire da una diluizione 1/20 (50µl del siero + 950µl di PBS 7,2)
• Su ciascun pozzetto del vetrino test si pongono 20µl di ciascuna diluizione del
siero e del controllo positivo.
• Si incuba a 37°c per 30’ in camera umida.
• Si lava il vetrino in PBS 7,2
• Si asciuga a temperatura ambiente
• Si pongono 20µl del coniugato (anti IgG-A-M umane coniugate con isotiocianato
di fluoresceina diluito 1/30) con l’aggiunta di una goccia di blu evans, su ciascun
pozzetto del vetrino test.
• Si incuba a 37°c per 30’ in camera umida,
• Si lava e si asciuga come sopra
• Si monta il vetrino con glicerina tamponata e si osserva al microscopio a fluorescenza
a 40x
In caso di positivita’ si osserveranno le Leishmanie, sul vetrino test, intensamente
verde brillante, la titolazione è data dall’ultimo pozzetto che presenta fluorescenza.
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Promastigoti di Leishmania infantum: IFI+ Promastigoti di Leishmania infantum: IFI-
Il limite del test
Pur essendo molto sensibile e specifico, tale test, presenta dei limiti:
positività aspecifiche si sono osservate in pazienti che avevano malattie autoimmuni;
anticorpi anti-DNA, anti-nucleo e anti-tubulina rendono fluorescenti aspecificamen-