La Diagnosi di Laboratorio delle Malattie da Protozoi - tutte mappe

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Le amebe a vita libera che possono essere causa, nell’uomo, di gravi infezioni sono Naegleria fowleri e Acantamoeba spp. che determinano la meningoencefalite amebica primaria, la encefalite granulomatosa amebica e la cheratite amebica. La trasmissione all’uomo di questi protozoi può avvenire per via nasale nuotando nelle acque calde (30-40°C) di laghi stagni o piscine anche termali contaminati dalle cisti di questo protozoo, o per via aerea con localizzazioni nella cornea o nell’apparato respiratorio e nel sistema nervoso centrale. 240 trofozoite Naegleria spp. e Acantamoeba spp.: Ciclo Biologico Naegleria Acantamoeba cisti flagellato cisti trofozoite
Naegleria In acqua dolce si presenta in fase flagellata (8-18µ) con due flagelli polari anteriori, mentre in soluzioni isotoniche si presentano in una fase ameboide (10-25µ). Le forme di resistenza (cisti) hanno un solo nucleo e servono per la disseminazione dei protozoi per via aerea. L’infezione può essere contratta per via nasale nuotando nell’acqua calde (30°-40°) di laghi, stagni o piscine, anche termali. I trofozoiti penetrano attraverso la mucosa nasale e raggiungono il sistema nervoso centrale. La malattia, dopo una incubazione di 3-7 giorni, inizia bruscamente con cefalea, vomito, rigidità nucale e febbre. Dopo 2-3 giorni compaiono agitazione psicomotoria e convulsioni seguite da paralisi flaccide e stato comatoso. L’esito è spesso letale. La diagnosi di laboratorio si fonda sull’esame del liquido cefalo-rachidiano, che appare torbido ed emorragico, con leucocitosi neutrofila, aumento delle proteine e diminuzione del glucosio. Il liquor, una volta prelevato, deve essere tenuto a temperatura ambiente, non deve essere refrigerato o diluito e deve pervenire in laboratorio al massimo entro 24 ore. In laboratorio, viene centrifugato a basso numero di giri, 200 giri per 10’, per evitare di distruggere le eventuali amebe presenti. Si elimina la maggior parte di liquido sovranatante, si risospende il sedimento e si allestiscono dei vetrini per l’esame a fresco e per le colorazioni specifiche. All’esame microscopico a fresco si evidenziano i trofozoiti amebici di 15-30µ attivamente mobili per emissione di pseudopodi ialini, provvisti, spesso, di evuntuale vacuolo pulsante, polimorfi con voluminosi granuli intracitoplasmatici e soprattutto con nucleo caratterizzato da un voluminoso cariosoma centrale. Coltura Trofozoite di Neglaeria spp. 400x (Campo oscuro) L’isolamento delle amebe dal liquor o da materiale biopsato si effettua utilizzando un terreno all’agar non nutritivo distribuito in piastre di Petri e ricoperto da una sospensione di batteri Gram negativi (es. E.coli) vivi o uccisi al calore. Le colture incubate a 37°C vanno osservate per una decina di giorni: la positività sarà evidenziata dalla comparsa di placche di lisi nella patina batterica e da un fronte di trofozoiti che avanza in senso centrifugo. Prelevando con ansa questo fronte si può effettuare un esame microscopico per confermare la presenza, nel terreno di coltura, delle amebe. Naegleria presenta inoltre la fase flagellata che manca in Acanthamoeba (v. sotto). Questa caratteristica viene messa in evidenza quando nel terreno di coltura viene aggiunta acqua distillata, dopo 4-24h si evidenzia la tipica forma a sigaro allungata della fase flagellata. 241
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