La Diagnosi di Laboratorio delle Malattie da Protozoi - tutte mappe

La diagnosi di laboratorio si fonda, su metodi diretti ricercando il protozoo nel materiale
biologico ottenuto per grattamento o per aspirazione dai bordi delle lesioni.
Questo materiale viene in parte strisciato su dei vetrini portaoggetto, lasciato asciugare
e colorato con May-Grunwald Giemsa, in parte posto in provette con EDTA, per
la coltura.
Metodi diretti
1. Colorazione May-Grunwald Giemsa
2. Coltura
1. Colorazione May-Grunwald Giemsa
I preparati, colorati, si osservano al microscopio ottico con obiettivo 100x.
In caso di positività, si evidenzieranno gli amastigoti di Leishmania, intra ed extracellulari,
come corpiccioli rotondeggianti od ovoidali della grandezza di 1.5-4µ con
nucleo eccentrico, cinetoplasto bastoncellare affianco al nucleo, entrambi colorati
in rosso violaceo e con citoplasma colorato in azzurro.
Amastigoti di Leishmania: Biopsia cutanea 1000x (Col. MGG)
2. Coltura
Il materiale raccolto in provetta con EDTA viene utilizzato per l’allestimento della coltura;
come terreno utilizziamo quello di Tobie modificato da Evans (EMTM 1987)
Nel terreno completo vengono inoculate 3-5 gocce di biopsato e viene incubato a 23° C
per al massimo 30 giorni; trascorsi i primi 10-15 giorni si effettua una prima osservazione
microscopica per evidenziare la positività
della coltura, in caso di negatività, si effettua
una ulteriore semina, 2-3 gocce di fase liquida
si inoculano in terreno di coltura fresco.
In caso di positività della coltura si evidenzieranno,
al microscopio ottico, i promastigoti
che appaiono come flagellati mobili lunghi 10-
15µ con nucleo centrale ed il cinetoplasto all’estremità
anteriore del corpo del protozoo da
cui si origina un unico flagello lungo fino a 15µ. Promastigoti di Leishmania:
Coltura in vitro 400x
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