La Diagnosi di Laboratorio delle Malattie da Protozoi - tutte mappe

CONCENTRAZIONE PER SEDIMENTAZIONE (RIDLEY)
1) Con una palettina di legno stemperare 2 o 3 g di copros in flaconi di SAF Fixative
fino ad ottenere una sospensione omogenea, attendere 30’ perché il fissativo agisca
ed agitare energicamente il flacone.
2) Aggiungere 4 gocce di soluzione mucolitica nel flacone (con campioni molto
mucosi si possono aggiungere fino ad 8 gocce di soluzione mucolitica)
3) Tappare e agitare bene per qualche secondo.
4) Inserire un imbutino a maglie da 250 µm in una provetta.
5) Filtrare almeno 3 ml di sospensione di copros trattata come descritto precedentemente
(punto 1) senza esercitare azioni meccaniche per favorire la filtrazione.
Nel caso di copros acquoso filtrare un volume maggiore (fino a 10-12 ml).
6) Eliminare l’imbuto e aggiungere alla provetta soluzione fisiologica (in via alternativa
si può utilizzare acqua di rubinetto oppure soluzione di formalina al 10%)
fino a riempirla.
7) Centrifugare per 2’ a 500 g (1800-2000 r.p.m. nelle comuni centrifughe da
banco)
8) Decantare il surnatante e conservare il sedimento (circa 1 ml).
(Una parte del sedimento può essere usato per la ricerca del Cryptosporidium
attraverso l’allestimento di strisci su vetrini per colorazioni permanenti)
9) Risospendere il sedimento in 9 ml di formalina al 10%.
10) Aggiungere 3 ml di acetato di etile, tappare la provetta, agitare per circa 30”
invertendo più volte la provetta, quindi togliere il tappo (durante l’agitazione si
forma una pressione positiva all’interno della provetta, prestare quindi la massima
attenzione al momento di togliere il tappo, in quanto si può formare un aerosol
di materiale di copros. Operare tenendo la provetta lontana dal corpo).
11) Centrifugare per 2’ a 500 g (1800-2000 r.p.m. nelle comuni centrifughe da
banco).
Dopo la centrifugazione sono visibili 4 distinti strati
dall’alto verso il basso (vedi fig.1)
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a) strato di acetato di etile o solvente
b) strato di detriti di copros
c) strato acquoso poco colorato (formalina)
d) sedimento (0.25 - 0.5 ml)
Fig. 1 - Strati ottenuti dalla
centrifugazione