La Diagnosi di Laboratorio delle Malattie da Protozoi - tutte mappe

4. Immunofluorescenza Indiretta (IFI)
• Depositare 20 µl. del campione, trattato, nel pozzetto di un vetrino per IFI.
• Lasciar asciugare il preparato per 24 h.
• Fissare in acetone.
• Deporre 20 µl. di enzima mucolitico preparato al momento dell’uso, diluito 1/10.
• Incubare in camera umida a 37°C per 30’.
• Lavare con acqua distillata delicatamente e lasciar asciugare.
• Deporre 20 µl. di anticorpo monoclonale (IgG murine).
• Incubare in camera umida a 37°c per 15’.
• Lavare con acqua distillata delicatamente e lasciar asciugare.
• Deporre 20 µl. di coniugato (anti-IgG murine legate ad isotiocianato di fluoresceina).
• Incubare in camera umida a 37°c per 15’.
• Lavare con acqua distillata delicatamente e lasciar asciugare.
• Depositare una goccia di glicerina tamponata sul pozzetto, coprire con coprioggetto.
• Osservare con microscopio a fluorescenza l’intero preparato con obiettivo 20 e 40x.
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P. jiroveci: cisti rotonde od ovali di color verde mela contrastano sul fondo nero-marrone.