La Diagnosi di Laboratorio delle Malattie da Protozoi - tutte mappe

3. Saggio Immunoenzimatico (ELISA)
Prelievo di sangue in provetta da sierologia
• Adsorbimento dell’antigene specifico di Entamoeba histolytica sul fondo di una
vaschetta di reazione (provetta, piastra Petri, pozzetto di una piastra per ELISA.
• Un’aliquota di una diluizione del siero in esame viene aggiunta alla vaschetta di
reazione.
• Dopo l’incubazione, per permettere la formazione dell’eventuale complesso antigene-anticorpo,
la soluzione che contiene l’anticorpo libero viene rimossa.
• Incubazione con anticorpo secondario per la rivelazione del complesso antigeneanticorpo
primario. Allontanamento dell’anticorpo secondario in eccesso.
L’anticorpo secondario formerà un complesso con l’anticorpo primario a sua
volta associato all’antigene di Entamoeba. L’anticorpo secondario è modificato e
porta legato un enzima (tipicamente perossidasi o fosfatasi alcalina).
• Rilevazione del complesso antigene-anticorpo: aggiunta del substrato dell’enzima
coniugato all’anticorpo secondario.
Si sceglie un substrato sintetico per cui il prodotto della reazione con l’enzima coniugato
all’anticorpo secondario è colorato ( tipicamente: giallo per la fosfatasi alcalina
o rosso per la perossidasi), la presenza del complesso antigene-anticorpo primario
viene rilevata attraverso lo sviluppo del colore. L’intensità del colore dipenderà (a
parità di tempo di incubazione) dal numero di complessi presenti e quindi dalla quantità
di anticorpi specifici presenti nel campione.
Risultati di un test ELISA
L’intensità del colore giallo nei diversi pozzetti della piastra ELISA è proporzionale al
numero di complessi antigene-anticorpo (primario) formati e quindi alla concentrazione
dell’anticorpo (in grado di legare l’anticorpo primario) nel campione analizzato.
Piastra del test in ELISA
95