La Diagnosi di Laboratorio delle Malattie da Protozoi - tutte mappe

Metodi indiretti
5. Immunofluorescenza Indiretta (IFI)
Ricerca degli anticorpi anti-Plasmodium
In commercio sono disponibili vetrini con emazie parassitate dai P. falciparum da testare
con il siero del paziente utilizzando la tecnica di immunofluorescenza indiretta
La metodica utilizzata con l’impiego di questi vetrini è descritta di seguito:
• Scomplementare il siero del paziente in esame a 56°C. per 30’.
•Effettuare delle diluizioni a raddoppio del siero e cimentare ciascuna diluizione
con un pozzetto del vetrino test.
• Incubare in camera umida a 37°c per 30’.
• Lavare con acqua distillata delicatamente e lasciar asciugare.
• Deporre 20 µl. di coniugato anti IgG umane legato ad isotiocianato di fluoresceina.
• Incubare in camera umida a 37°c per 30’.
• Lavare con acqua distillata delicatamente e lasciar
asciugare.
• Depositare una goccia di glicerina tamponata sul
pozzetto, coprire con coprioggetto.
• Osservare con microscopio a fluorescenza l’intero
preparato con obiettivo 40x.
I protozoi presenti sul vetrino appariranno di color
verde mela sul fondo nero-marrone se nel siero del
paziente sono presenti anticorpi specifici.
Interpretazione dei risultati
Titoli < 1/20 indicano assenza di infezione
Titoli compresi tra 1/20 e 1/40 indicano probabile esposizione passata all’infezione
malarica da P. falciparum o possibile infezione attiva da P. malariae o vivax. Il test va
ripetuto dopo 15 gg
Titoli > 1/80 indicano infezione attiva da P. falciparum
La diagnosi necessita comunque del reperto del protozoo nel sangue periferico.
Utilità
Emazie parassitate fluorescenti
Possibilità di effettuare uno screening sui donatori di sangue che hanno soggiornato
in un’area endemica.
Casi sospetti di malaria con negatività dello striscio.
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