La Diagnosi di Laboratorio delle Malattie da Protozoi - tutte mappe

Metodi indiretti
3. Immunofluorescenza Indiretta (IFI)
Si tratta, comunque, d’una metodica valida solo per l’evidenziazione di Babesia
microti (= Theileria), con buona sensibilità (88-96%) e specificità (90-100%), in
quanto per B. divergens essa risulta essere poco specifica.
In commercio sono disponibili vetrini con emazie parassitate da Babesia microti
La metodica utilizzata con l’impiego di questi vetrini è descritta di seguito:
• Scomplementare il siero del paziente in esame a 56°C.per 30’
•Effettuare delle diluizioni a raddoppio del siero e cimentare ciascuna diluizione
con un pozzetto del vetrino test
• Incubare in camera umida a 37°C per 30’.
• Lavare con PBS 7,2 delicatamente e lasciar asciugare.
• Deporre 20 µl. di coniugato anti IgG,IgM,IgA umane legate ad isotiocianato di
fluoresceina.
• Incubare in camera umida a 37°C per 30’.
• Lavare con PBS 7,2 delicatamente e lasciar asciugare.
• Depositare una goccia di glicerina tamponata sul pozzetto, coprire con coprioggetto.
Osservare con microscopio a fluorescenza l’intero preparato con obiettivo 40x.
I protozoi presenti sul vetrino appariranno di color verde mela sul fondo nero-marrone
se nel siero del paziente sono presenti anticorpi specifici.
Il titolo anticorpale significativo per determinare la positività di un risultato è di 1: 64
Il limite del test
Nel paziente con babesiosi gli anticorpi si sviluppano solamente in una fase tardiva
dell’infezione ed in effetti la metodica ad immunofluorescenza indiretta viene usata,
come controllo, nei casi in cui la diagnosi da Babesia microti sia già stata posta con
l’esame microscopico diretto.
Il titolo anticorpale può rimanere elevato dai 13 mesi fino a 6 anni ed alcuni autori
hanno notato che una diminuzione più lenta del livello delle IgG si può associare ad
una persistente presenza del protozoo.
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