La Diagnosi di Laboratorio delle Malattie da Protozoi - tutte mappe
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2. Colorazione <strong>di</strong> Giemsa<br />
<strong>La</strong> ricerca <strong>di</strong> Trypanosoma si completa con l’osservazione degli strisci <strong>di</strong> sangue colorati<br />
con May-Grunwald Giemsa che permette <strong>di</strong> evidenziare, se presenti, i tripanosomi<br />
come tripomastigoti pleiomorfi <strong>di</strong> 18-35 µ <strong>di</strong> lunghezza, cinetoplasto puntiforme,<br />
situato posteriormente, colorato in rosso porpora.<br />
Dal cinetoplasto parte un unico flagello che si prolunga verso il margine esterno della<br />
membrana ondulante e termina verso la parte anteriore del corpo come flagello libero.<br />
Il nucleo color violetto è situato centralmente al corpo del protozoo che appare colorato<br />
in rosa pallido.<br />
Si possono identificare, al microscopio ottico, le varie specie <strong>di</strong> Trypanosoma:<br />
Trypanosoma brucei corpo <strong>di</strong> 18-35µ con cinetoplasto puntiforme.<br />
Trypanosoma cruzi<br />
Trypanosoma rangeli<br />
corpo <strong>di</strong> 12-30µ spesso <strong>di</strong>sposto a “C”, cinetoplasto<br />
grande e rotondo.<br />
corpo più sottile <strong>di</strong> 27-32µ con cinetoplasto piccolo<br />
posto in posizione terminale e nucleo situato<br />
anteriormente.<br />
Trypanosoma cruzi striscio 1000x (Col. MGG) Trypanosoma brucei striscio 1000x (Col. MGG)<br />
3. Ricerca dopo concentrazione <strong>da</strong>l prelievo in EDTA<br />
Dal prelievo venoso posto in EDTA si preleva 1ml <strong>di</strong> sangue e si miscela, in una provetta<br />
<strong>da</strong> centrifuga, con 10ml <strong>di</strong> formalina al 1-2%. Si attende 10’ che le emazie siano<br />
ben emolizzate. Si centrifuga a 3000 giri per 5’; si elimina il sovranatante e si risospende<br />
il se<strong>di</strong>mento con soluzione fisiologica. Si depone una goccia <strong>di</strong> se<strong>di</strong>mento su<br />
un vetrino sabbiato, con i <strong>da</strong>ti del paziente e <strong>da</strong>ta del prelievo, e si effettuano strisci<br />
sottili. I vetrini asciugati vanno colorati con May Grunwald-Giemsa ed osservati al<br />
microscopio ottico con obiettivo 100x.<br />
4. Esame del buffy-coat:<br />
si esegue centrifugando a 3000 giri per 10-15 minuti il sangue prelevato in una provetta<br />
con EDTA in modo <strong>da</strong> ottenere la separazione del plasma <strong>da</strong>gli eritrociti, fra le<br />
due fasi si <strong>di</strong>spongono i leucociti e in caso <strong>di</strong> positività i tripanosomi.<br />
Con questo materiale si allestisce uno striscio e una goccia spessa per la colorazione<br />
May Grunwald-Giemsa<br />
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