La Diagnosi di Laboratorio delle Malattie da Protozoi - tutte mappe

Le tecniche indirette
Nel Laboratorio di Protozoologia, possono essere eseguite tecniche indirette di ricerca,
cioè ricerche degli anticorpi eventualmente prodotti, dal paziente in esame, a
seguito di un processo patologico a carico di organi o tessuti indotto dal protozoo.
In questi casi, si ricorre all’impiego di antigeni specifici protozoari che legheranno gli
anticorpi eventualmente presenti nel siero del paziente.
Questo legame (antigene protozoario-anticorpo specifico prodotto) può essere evidenziato
con tecniche di:
• IFI (Immunofluorescenza Indiretta)
In commercio sono disponibili vetrini, multi-pozzetto, in cui sono fissati organismi
interi di Leishmania, Giardia, Cryptosporidium, Plasmodium, Trypanosoma,
Amebe e Toxoplasma.
Si pone nei pozzetti con l’antigene un’aliquota della diluizione scalare effettuata al
siero del paziente, dopo l’incubazione e i lavaggi, si pone l’antisiero coniugato con
fluorosceina.
Se presenti gli anticorpi nel campione analizzato, i protozoi sul pozzetto del vetrino
appariranno di colore verde mela sul fondo nero-marrone.
• Emoagglutinazione (IHA)
Test di emoagglutinazione indiretta su micropiastra per la determinazione qualitativa
e semiquantitativa di anticorpi specifici; la negatività del test sarà evidenziata
dalla sedimentazione degli eritrociti che formeranno, sul fondo della micropiastra,
un bottone a margini netti, al contrario la positività sarà evidenziata dalla presenza
di una sospensione omogenea.
Il titolo anticorpale presente nel siero in esame corrisponderà alla più alta diluizione
in cui si osserva ancora l’emoagglutinazione.
In commercio sono disponibili diversi kit per l’emoagglutinazione contenenti emazie
sensibilizzate con antigeni specifici; si possono ricercare così, in Protozoologia,
anticorpi anti-Ameba, anti-Trypanosoma ecc., si raccomanda, nell’acquisto di questi
test, che l’antigene specifico presente nel kit sia legato ad emazie umane e non
ad emazie animali perché in quest’ultimo caso nell’esecuzione del test si possono
oservare false reazioni di agglutinazione.
• Saggio immunoenzimatico (ELISA)
La tecnica rileva il complesso antigene-anticorpo mediante enzyme-linked immunosorbentassay).
PROCEDURA:
• Adsorbimento dell’antigene sul fondo di una vaschetta di reazione (provetta, piastra
Petri, pozzetto di una piastra multi-pozzetto in genere 96) per ELISA.
• Un’aliquota delle soluzioni da analizzare, per la ricerca dell’anticorpo specifico,
viene aggiunta alla vaschetta di reazione.
• Dopo l’incubazione, per permettere la formazione dell’eventuale complesso antigene-anticorpo,
la soluzione viene rimossa.
• Incubazione con anticorpo secondario per la rivelazione del complesso antigeneanticorpo
primario.
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