La Diagnosi di Laboratorio delle Malattie da Protozoi - tutte mappe

La soluzione di lavoro viene preparata con:
Aggiungere all’acqua le soluzioni A e B e miscelare bene. Unire il blu di metilene
e agitare fino a completo scioglimento
Si procede come i preparati con soluzione fisiologica e con soluzione di Dobell
ponendo però sul vetrino una grande goccia di soluzione tamponata di blu di metilene.
Attendere 5 - 10 minuti prima di esaminare il vetrino per permettere al colorante
di penetrare nei trofozoiti.
Il blu di metilene sovracolora i trofozoiti in circa 30 minuti, quindi il preparato va
esaminato entro questo lasso di tempo.
Questo tipo di preparato va effettuato solamente con copros fresco e non può essere
utilizzato con campioni conservati in cui i trofozoiti sono stati fissati.
d) Il preparato con carbolfuxina viene utilizzato per la ricerca dei coccidi;
è una colorazione estemporanea che in pochi minuti consente di escludere la presenza
di coccidi nel campione se non si osservano forme sospette. La positività
della colorazione non implica, però la presenza certa dei coccidi che va confermata
con colorazioni più specifiche (alcune spore di miceti possono somigliare alle
oocisti di Cryptosporidium).
Esecuzione:
Soluzione A 46.3 ml
Soluzione B 3.7 ml
Blu di metilene per colorazione 0.5 g
Acqua distillata 50 ml
deporre su un vetrino una goccia della sospensione di copros; si aggiunge una goccia
di carbolfucsina; si mescola e si striscia in modo da ottenere bande sottili alternate
a bande spesse. Si lascia asciugare per poco tempo e quindi si copre con
coprioggetto.
Si osserva al microscopio con obiettivo 20x e 40x;
in caso di sospetta presenza di Cryptosporidium si osserverà la presenza di formazioni
tondeggianti di 5 - 6µ incolori in campo rosso e si procederà alle colorazioni
specifiche: la colorazione di Kynioun e l’immunoflorescenza.
Per effettuare l’immunofluorescenza deporre su un vetrino con pozzetto 20 µl di
sospensione di copros, lasciar asciugare il campione per alcune ore, fissare con
acetone e procedere con la tecnica di immunofluorescenza diretta specifica per
Cryptosporidium, quindi osservare il preparato al microscopio a fluorescenza.
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