La Diagnosi di Laboratorio delle Malattie da Protozoi - tutte mappe

Naegleria
In acqua dolce si presenta in fase flagellata (8-18µ) con due flagelli polari anteriori,
mentre in soluzioni isotoniche si presentano in una fase ameboide (10-25µ). Le forme
di resistenza (cisti) hanno un solo nucleo e servono per la disseminazione dei protozoi
per via aerea. L’infezione può essere contratta per via nasale nuotando nell’acqua
calde (30°-40°) di laghi, stagni o piscine, anche termali.
I trofozoiti penetrano attraverso la mucosa nasale e raggiungono il sistema nervoso centrale.
La malattia, dopo una incubazione di 3-7 giorni, inizia bruscamente con cefalea,
vomito, rigidità nucale e febbre. Dopo 2-3 giorni compaiono agitazione psicomotoria e
convulsioni seguite da paralisi flaccide e stato comatoso. L’esito è spesso letale.
La diagnosi di laboratorio si fonda sull’esame del liquido cefalo-rachidiano, che
appare torbido ed emorragico, con leucocitosi neutrofila, aumento delle proteine e
diminuzione del glucosio.
Il liquor, una volta prelevato, deve essere tenuto a temperatura ambiente, non deve
essere refrigerato o diluito e deve pervenire in laboratorio al massimo entro 24 ore.
In laboratorio, viene centrifugato a basso numero
di giri, 200 giri per 10’, per evitare di distruggere
le eventuali amebe presenti.
Si elimina la maggior parte di liquido sovranatante,
si risospende il sedimento e si allestiscono dei
vetrini per l’esame a fresco e per le colorazioni
specifiche.
All’esame microscopico a fresco si evidenziano i
trofozoiti amebici di 15-30µ attivamente mobili
per emissione di pseudopodi ialini, provvisti,
spesso, di evuntuale vacuolo pulsante, polimorfi
con voluminosi granuli intracitoplasmatici e
soprattutto con nucleo caratterizzato da un voluminoso
cariosoma centrale.
Coltura
Trofozoite di Neglaeria spp. 400x
(Campo oscuro)
L’isolamento delle amebe dal liquor o da materiale biopsato si effettua utilizzando un
terreno all’agar non nutritivo distribuito in piastre di Petri e ricoperto da una sospensione
di batteri Gram negativi (es. E.coli) vivi o uccisi al calore.
Le colture incubate a 37°C vanno osservate per una decina di giorni: la positività sarà
evidenziata dalla comparsa di placche di lisi nella patina batterica e da un fronte di
trofozoiti che avanza in senso centrifugo. Prelevando con ansa questo fronte si può
effettuare un esame microscopico per confermare la presenza, nel terreno di coltura,
delle amebe.
Naegleria presenta inoltre la fase flagellata che manca in Acanthamoeba (v. sotto).
Questa caratteristica viene messa in evidenza quando nel terreno di coltura viene
aggiunta acqua distillata, dopo 4-24h si evidenzia la tipica forma a sigaro allungata
della fase flagellata.
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