La Diagnosi di Laboratorio delle Malattie da Protozoi - tutte mappe

COLORAZIONE EMATOSSILINA FERRICA
Nel 1975, Spencer e Monroe hanno descritto una modificazione della colorazione
con Ematossilina Ferrica. Questa colorazione può essere usata sia con campioni
freschi, sia con campioni conservati in PVA Fixative o SAF Fixative. Due metodi di
base sono stati proposti per la colorazione permanente dei parassiti intestinali nei
campioni di copros: la colorazione tricromica di Wheatley e quella con
Ematossilina Ferrica. Entrambi hanno ottenuto una generale approvazione. Nonostante
che la colorazione tricromica di Wheatley sia molto utilizzata, la colorazione
con Ematossilina Ferrica rimane alla base della parassitologia diagnostica intestinale.
Pur essendo accettata come metodo standard, la colorazione con
Ematossilina Ferrica ha posto parecchi problemi: per esempio il lungo tempo
richiesto per portare a termine la colorazione, le difficoltà incontrate per ottenere
dettagli nucleari e citoplasmatici ben differenziati e la notevole esperienza necessaria
per ottenere risultati uniformi. Le soluzioni messe in atto per superare tali problemi
sono consistite nella differenziazione con Allume Ferrico, nella revisione dei
tempi delle fasi critiche della colorazione, nell’uso di soluzioni riscaldate, nell’omissione
dell’uso di mordenzanti e nell’impiego di ematossilina resa acida mediante
l’aggiunta di acido fosfotungstico. Tali soluzioni hanno rimediato, in parte alle
carenze della metodica originale; ma nel contempo, hanno sacrificato o la qualità,
o la facilità di esecuzione. Il metodo proposto da Spencer e Monroe è leggermente
più lungo rispetto alla tricromica di Wheatley, ma offre un’eccellente differenziazione
delle strutture, inclusioni nucleari e citoplasmatiche; fornisce, inoltre un
buon contrasto fra gli elementi dei parassiti ed il materiale di fondo, garantendo
risultati ripetitivi.
COMPOSIZIONE DEI COLORANTI
Ematossilina Ferrica Soluzione di Lavoro:
1. Mescolare insieme la Soluzione A (Soluzione madre di ematossilina in alcool etilico)
e la Soluzione B (soluzione di sali di ferro) in parti uguali (rapporto 1:1).
2. Questa soluzione di lavoro si conserva per 7 giorni. (Nota: Prima dell’uso, saggiare
la soluzione di lavoro per verificare se è ancora utilizzabile: aggiungere
poche gocce di soluzione ad acqua di rubinetto alcalina. Se si evidenzia un rapido
viraggio al blu, è utilizzabile: se persiste il colore marrone, è necessario preparare
soluzione fresca.)
Ammoniaca/Etanolo al 50% ed Ammoniaca/Etanolo al 70%
1. Addizionare a 50 ml di Etanolo al 50%, 3-5 gocce di ammoniaca.
2. Addizionare a 50 ml di Etanolo al 70%, 3-5 gocce di ammoniaca.
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