La Diagnosi di Laboratorio delle Malattie da Protozoi - tutte mappe

2. Immunofluorescenza Diretta (IFD)
In commercio sono disponibili anticorpi monoclonali diretti agli antigeni di
Cryptosporidium
La metodica utilizzata con l’impiego di questi monoclonali è descritta di seguito:
• Depositare 20 µl di una sospensione di espettorato o BAl sul pozzetto di un vetrino
per IFA.
• Lasciar asciugare all’aria il preparato per 24 h.
• Fissare in acetone per 10’.
• Deporre 20 µl. di anticorpo monoclonale legato ad isotiocianato di fluoresceina
sul pozzetto.
• Incubare in camera umida a 37°c per 30’.
• Lavare con acqua distillata delicatamente e lasciar asciugare.
• Depositare una goccia di glicerina tamponata sul pozzetto, coprire con coprioggetto.
Osservare con microscopio a fluorescenza l’intero preparato con obiettivo 20 e 40x.
I protozoi eventualmente presenti appariranno di color verde mela sul fondo neromarrone
Oocisti di Cryptosporidium spp. 400x (IFD+)
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