La Diagnosi di Laboratorio delle Malattie da Protozoi - tutte mappe

5. Esame del liquido cefalo-rachidiano (nelle forme meningoencefaliche):
per la ricerca del Trypanosoma brucei gambiense
Il liquor, prelevato con la puntura intrarachidiale, quasi sempre limpido, presenta
aumento delle proteine, riduzione del glucosio, presenza di pleocitosi linfo-monocitaria.
Deve essere tenuto a temperatura ambiente, non deve essere refrigerato o diluito e
deve pervenire in laboratorio al massimo entro 24 ore.
In laboratorio, viene centrifugato a basso numero di giri, 200 giri per 10’, per evitare
di distruggere gli eventuali parassiti presenti.
Si elimina la maggior parte di liquido sovranatante, si risospende il sedimento e si
allestiscono dei vetrini per l’esame a fresco e per la colorazione May Grunwald-
Giemsa. All’esame microscopico si evidenziano i tripanosomi.
6. Coltura
I Tripanosomi sono facilmente coltivabili utilizzando il terreno EMTM (Tobie mod.
da Evans) essendo lo stesso terreno utilizato per la coltura di Leishmania si rimanda
la descrizione al paragrafo dedicato alla coltura Leishmania.
La diagnosi di laboratorio può essere eseguita anche in maniera indiretta, cioè con la
ricerca degli anticorpi specifici, prodotti dal paziente in esame, utilizzando l’emoagglutinazione
indiretta e la immnunofluorescenza.
Metodi indiretti
7. Ricerca degli anticorpi anti-Trypanosoma
Emoagglutinazione indiretta (IHA)
Prelievo di sangue in provetta da sierologia
Il siero del campione in esame viene scomplementato a 56° per 30’
La ricerca viene effettuata con il metodo dell’emoagglutinazione indiretta (IHA), si
utilizza un kit contenente emazia umane sensibilizzate con antigeni di Trypanosoma
cruzi, un siero di controllo positivo e un siero di controllo negativo.
Si esegue seguendo il protocollo operativo conservato nel kit in uso.
In caso di positivita’ la diagnosi sierologica viene confermata con un altro metodo,
cioé l’immunofluorescenza indiretta.
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Tripanosomi nel liquor 1000x (Col. MGG)