Methoden zur Evaluation von Zytotoxizit¨at und Struktur ... - OPUS

102 4. Ergebnisse und Diskussion
Abbildung 4.27: Wiederholte Messungen der gleichen M. luteus-Probe unter Verwendung des gleichen
Pufferansatzes. Bei jeder Trennung wurde ein neues Puffergefäß der gleichen Puffercharge verwendet.
Für Trennpuffer, CE- und Probenbedingungen, siehe Abbildung 4.25
4.2.7 Reproduzierbarkeit
Zur Eignung und Weiterentwicklung der CE-Methode zur Bestimmung der Aktivität
antibiotischer Substanzen ist vor allem die Reproduzierbarkeit der elektrophoretischen
Fingerabdrücke in qualitativer und quantitativer Hinsicht maßgeblich. Wiederholmes-
sungen der gleichen Bakterienprobe von M. luteus zur Untersuchung der Präzision
bezüglich der Quantifizierung und der Migrationszeiten fielen jedoch selbst unter
Verwendung der in den letzten Abschnitten optimierten CE- und Probenbedingun-
gen enttäuschend aus. Die Trennungen wurden zwar mit dem gleichen Pufferansatz
durchgeführt, doch wurden für jede Trennung neue Puffervials verwendet, so dass die
fehlende Reproduzierbarkeit nicht durch die Änderungen in der Elektrolytzusammen-
setztung aufgrund der hohen anliegenden Spannung begründet werden konnte. Das
von Trennung zu Trennung sich sowohl in Signalanzahl, Migrationszeit als auch in
Signalintensität ändernde Peakmuster ist in Abbildung 4.27A dargestellt. Abbildung
4.27B zeigt einen neben den variierenden Elektropherogrammen beobachteten konti-
nuierlichen Stromanstieg, welcher möglicherweise die Ursache für die schlechte Re-
produzierbarkeit ist, und durch die Zunahme der Ionenstärke hervorgerufen wird.
Diese kann sowohl durch Zelllyse in der Probensuspension als auch durch Instabilität
der Pufferlösung bedingt sein. Eine weitere mögliche Ursache für die fehlende Repro-
duzierbarkeit der Elektropherogramme liegt im Alterungsprozess der Zellen selbst.
Durch Änderungen der Oberflächenladung und vermehrter Clusterbildung ändert
sich das Größe-zu-Ladungsverhältnis und damit die elektrophoretische Mobilität. Um
den Beitrag von Pufferlösung und Zellalterung zu bestimmen, wurden die folgenden