Methoden zur Evaluation von Zytotoxizit¨at und Struktur ... - OPUS

5.1 Bakteriologische Untersuchungen 167
5.1.7.2.2 Kultur-Medien
Müller-Hinton-Agarplatten
Müller-Hinton-Agarplatten wurden von Oxoid (Wesel, Deutschland) mit der folgen-
den Zusammensetzung bezogen:
Getrockneter Rinderextrakt : 2 g/l
Caseinhydrolysat : 17.5 g/l
Stärke : 1.5 g/l
Brain-Hart-Infusion(BHI)-Bouillon
Das pulverisierte BHI-Medium wurde von Oxoid (Wesel, Deutschland) mit folgender
Zusammensetzung bezogen:
Getrockneter Rinder-Herz-Extrakt : 12.5 g/l
Getrockneter Kalbs-Hirn-Extrakt : 5.0 g/l
5.1.7.2.3 Kultivierung
Pepton : 10 g/l
Glukose : 2 g/l
Chloride : 5 g/l
Dinatrium-Phosphat : 2.5 g/l
Die Bakterien-Spezies wurden in gefriergetrocknetem Zustand von der DSMZ bezo-
gen. Suspendiert in BHI-Bouillon wurden sie zunächst auf Müller-Hinton-Agarplatten
ausgestrichen und bei 30 ◦ C angezüchtet. Die Agarkultur diente für den Zeitraum von
einer Woche als Bakterienreservoir. Vor der Analyse wurden Bakterien in 5 ml der
BHI-Bouillon überimpft und bei 30 ◦ C für 12 h inkubiert. Diese Bakteriensuspension
diente zur Vorbereitung der verschiedenen CE-, NMR- und fluoreszenzspektroskopi-
schen Proben.
5.1.7.2.4 Zellkonzentration
Die Zellkonzentration wurde UV/VIS-spektroskopisch durch Messung der optischen
Dichte (OD) bei 600 nm und anschließendem Zählen der koloniebildenden Einheiten
(CFU) bestimmt. Zur letzteren Bestimmung wurden Bakterienproben in der exponen-
tiellen Phase mit einem bestimmten OD-Wert serienmäßig 1:10 verdünnt und ein defi-
niertes Volumen (1 ml) wurde auf BHI-Agar ausplattiert. Die Zellkonzentration ergab
sich durch visuelles Auszählen der gebildeten Kolonien nach einer Inkubation von 24
h bei 37 ◦ C.