Methoden zur Evaluation von Zytotoxizit¨at und Struktur ... - OPUS

84 4. Ergebnisse und Diskussion
Abbildung 4.14: Wachstumskurven
von M. luteus, P.
fluorescens und S. vestibularis in
BHI-Bouillon bei 30 ◦ C durch
Auftragung der OD600-Werte
OD 600
3.5
3.0
2.5
2.0
1.5
1.0
0.5
Micrococcus luteus
Pseudomonas fluorescens
Streptococcus vestibularis
0.0
0 5 10 15 20 25
gegen die Zeit. Zeit [h]
4.2.4.2 Wachstumskurven
In Abbildung 4.14 wurde die optische Dichte (OD) bei 600 nm für alle drei Bakterienar-
ten gegen die Zeit aufgetragen. Wie in Abschnitt 3.2.2.5 beschrieben zeigt der zeitliche
OD-Verlauf die verschiedenen Wachstumsphasen. Für die kapillarelektrophoretische
Analyse war vor allem der Zeitraum der stationären Phase relevant, in der die Zellen
zwar ihren Stoffwechsel einstellen, aber dennoch vital sind. In dieser Phase sollte die
chemische Umgebung der Zellen im Kulturmedium, ihre Oberflächenladung und ihre
Tendenz zur Ketten- und Clusterbildung bis zum Beginn der Absterbephase konstant
bleiben. S. vestibularis zeigte das schnellste Zellwachstum. Die stationäre Phase wurde
bereits nach 8 h erreicht, bei P. fluorescens und M. luteus dagegen erst nach 18 h bzw.
nach 24 h.
4.2.4.3 Kalibrierung
Die Bestimmung der Zellkonzentration durch Messung der optischen Dichte erfor-
dert zunächst die Korrelation zwischen Signal und Konzentration unter Erfassung der
Gesamtzellzahl. Da weder die mikroskopische Auszählung in einer Zählkammer noch
die elektronische Auszählung mittels Coulter-Counter möglich waren, musste die Zell-
zahl durch Auszählen der koloniebildenden Einheiten (colony forming units, CFU) er-
folgen, wodurch genaugenommen nur vermehrungsfähige Zellen berücksichtigt wur-
den. Näherungsweise kann man jedoch bei einer Kultur in der exponentiellen und
frühen stationären Phase von 100 % lebensfähigen Zellen ausgehen. Die genaue Ver-
suchsdurchführung ist im Experimentellen Teil in Abschnitt 5.1.7.2.4 beschrieben. OD
und Zellzahl korrelieren nach Abschnitt 3.2.2.4 nach einer Funktion 1. Ordnung. Für
eine Korrelationsfunktion f(x) = ax + b ergaben sich für M. luteus, S. vestibularis und