Methoden zur Evaluation von Zytotoxizit¨at und Struktur ... - OPUS

4.2 Kapillarelektrophoretische Methode zur Analyse intakter Mikroorganismen 103
Experimente durchgeführt:
4.2.7.1 Pufferinstabilität
Wiederholte CE-Messungen wurden an reiner Pufferlösung in Abwesenheit suspen-
dierter Zellen vorgenommen. Dazu wurde für jede Trennung Puffer aus einem neuen
Vial aber von der gleichen Puffercharge verwendet. Von Messung zu Messung stieg
auch hier der Strom kontinuierlich, wodurch es einen ersten Hinweis für die Un-
beständigkeit des Puffers über mehrere Stunden gab. Ein Vergleich der pH-Werte und
Leitfähigkeiten von Pufferlösungen unter inerter Argon-Atmosphäre und Pufferlösun-
gen, bei welchen durch Rühren Begasung mit Luft-Atmosphäre stattfand, ist in Abbild-
ung 4.28 dargestellt.
pH
9.2
9.0
8.8
8.6
8.4
8.2
8.0
7.8
7.6
unter Sauerstoffzufuhr
inerte Atmosphaere
0 1 2 3 4 5 6 7
time [h]
(a) pH-Verlauf über die Zeit.
S/cm]
µ
conductivity [
50
45
40
35
30
25
20
15
unter Sauerstoffzufuhr
inerte Atmosphaere
10
0 1 2 3 4 5 6 7
time [h]
(b) Verlauf der Konduktivität über die Zeit.
Abbildung 4.28: Zeitlicher Verlauf der Instabilität des Trennpuffers
Während die Pufferlösung unter inerter Atmosphäre nur eine sehr langsame Verände-
rungen der Leitfähigkeit und des pH-Wertes zeigt, führt Begasung und damit ein ver-
stärkter CO2-Gasaustausch zu einem raschen Anstieg der Ionenstärke und einem ra-
schen pH-Abfall. Vermutlich erhöht gelöstes CO2 im Puffer (CO2 + H2O ⇒ HCO − 3 +
H + ) die Protonenkonzentration und führt damit, bedingt durch den schwach molaren
Trennpuffer, zum Überschreiten der Pufferkapazität und zu einem pH-Wert-Abfall.
⇒ Es empfiehlt sich deshalb die Pufferlösung unmittelbar vor jeder Trennung neu her-
zustellen.
4.2.7.2 Probeninstabilität
Unter Verwendung eines unmittelbar vor jeder Trennung neu hergestellten Puffers
wurden CE-Messungen der gleichen Micrococcus-Probe viermal hintereinander wie-
derholt (Elektropherogramme 1-4 in Abbildung 4.29). Bei gleichbleibendem Strom