Methoden zur Evaluation von Zytotoxizit¨at und Struktur ... - OPUS
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Kapitel 5<br />
Experimenteller Teil<br />
5.1 Bakteriologische Untersuchungen<br />
5.1.1 Kapillarelektrophorese (CE)<br />
5.1.1.1 Messapparatur <strong>und</strong> Geräteparameter<br />
Die elektrophoretische Charakterisierung der Bakterien-Spezies wurde an einem Beck-<br />
man-Gerät P/ACE System MDQ (Fullerton, CA, USA) unter Verwendung eines UV-<br />
Detektors bei 214 nm vorgenommen. Für die Aktivitätsbestimmungen verschiedener<br />
Antibiotika diente ein Argon-Laser-induzierter-Fluoreszenz-(LIF)-Detektor (488 nm)<br />
(Beckman, Krefeld, Deutschland), welcher im Zwei-Kanal-System mit einem 520 nm<br />
Bandpass- <strong>und</strong> einem 655 nm Longpass-Filter (Beckman) betrieben wurde. Die elek-<br />
trophoretische Trennung erfolgte unter Verwendung einer Quarzglaskapillare (Poly-<br />
micro Technologies, Phoenix, AZ, USA) mit einer Gesamtlänge <strong>von</strong> 31.5 cm, einer De-<br />
tektionslänge <strong>von</strong> 21.0 cm <strong>und</strong> einem Innendurchmesser <strong>von</strong> 100 µm bei einer konstant<br />
angelegten Spannung <strong>von</strong> 10 kV bei 23 ◦ C. Die Proben wurden an der Anode der Ka-<br />
pillare durch Anlegen eines Druckes <strong>von</strong> 0.5 psi für eine Dauer <strong>von</strong> 10 s injiziert.<br />
5.1.1.2 Spülschritte<br />
Konditionierung einer neuen Kapillare<br />
0.1 M HCl : 10 min, 20 psi<br />
0.1 M NaOH : 20 min, 20 psi<br />
Tageskonditionierung<br />
H2O : 10 min, 20 psi<br />
0.1 M NaOH : 20 min, 20 psi<br />
H2O : 10 min, 20 psi<br />
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