Methoden zur Evaluation von Zytotoxizit¨at und Struktur ... - OPUS

158 4. Ergebnisse und Diskussion
4.4.5.2 T2-Beeinflussung durch Vancomycin
Bevor die Wirkung des Vancomycin auf S. vestibularis über T2-Wachstumskurven un-
tersucht werden konnte, musste sicher gestellt werden, dass die gemessenen T2-Werte
von den eingesetzten Vancomycin-Konzentrationen an sich nicht beeinflusst werden.
Bei Vancomycin handelt es sich, wie bereits in Abschnitt 4.3.3 beschrieben, um ein Gly-
kopeptid mit zahlreichen ionisierbaren funktionellen Gruppen, wodurch eine Beein-
flussung der transversalen Relaxation mit abnehmendem pH-Wert und damit Ände-
rung der chemischen Austauschrate nicht auszuschließen war. Zur Überprüfung wur-
den T2-Werte von BHI-Medium mit Vancomycin-Konzentrationen im Bereich von 0.01
µM bis 100 µM bei unterschiedlichen pH-Werten und bei 30 ◦ C und 17.6 T bestimmt.
Die Verhältnisse zwischen diesen Relaxationszeiten und ihren entsprechenden Blind-
werten (T0 2 ) aus reinem Medium bei den verschiedenen pH-Werten sind in Abbildung
4.67 dargestellt. Sie zeigen abgesehen von kleinen Fehlern, die innerhalb der ex-
perimentellen Schwankungen durch Mittlung der T2-Werte über ca. 140 Pixeln la-
gen (siehe Experimenteller Teil Abschnitt 5.1.5.1.3), konstante Linien. Hierdurch ist
die Vancomycin-Unabhängigkeit der T2-Relaxation im betrachteten Konzentrations-
bereich bewiesen.
Abbildung 4.67: pH-Abhängigkeit
der T2-Werte des BHI-
Mediums mit unterschiedlichen
Vancomycin-Konzentrationen,
normiert auf die pH-abhängigen
T2-Werte von reinem
BHI-Medium. Gemessen wurden
die T2-Werte bei 30 ◦ C und
0.80
10
-2
17.6 T. Concentration [ µ M]
4.4.5.3 Bestimmung der antibiotischen Wirksamkeit
0
2
/T
2
T
1.30
1.25
1.20
1.15
1.10
1.05
1.00
0.95
0.90
0.85
-1
10 1 10
pH=4.98
pH=5.49
pH=5.98
pH=6.45
pH=7.13
Zur Bestimmung der antibiotischen Wirkung des Vancomycins auf S.vestibularis wurde
ein Probensatz von sieben 5 mm-NMR-Röhrchen präpariert. Ähnlich der Makrodilu-
tionsmethode (DIN 58940-5) wurden fünf dieser Röhrchen mit 2 ml Bakteriensuspen-
sion in einer Konzentration von 0.015 OD600 befüllt. Jedes dieser Inokula enthielt eine
1:10 Verdünnung von Vancomycin in einem Konzentrationsbereich von 0.01 µM bis
100 µM. Die sechste und siebte Probe bestand aus reinem Medium und einer unbehan-
delten Bakteriensuspension und diente als Negativ- bzw. Positivkontrolle. Von diesem
10
2