Methoden zur Evaluation von Zytotoxizit¨at und Struktur ... - OPUS

162 5. Experimenteller Teil
Spülschritte zwischen jeder Trennung
0.33 M H3PO4 : 16 min, 20 psi
H2O : 1 min, 20 psi
0.1 M NaOH : 3 min, 20 psi
H2O : 1 min, 20 psi
CE-Trennpuffer : 2.5 min, 20 psi
Durch 0.33 molaren Phosphatpuffer wird die polymere Polyethylenoxid-Lösung, die
im Puffer zum mobilen Beschichten der Kapillare verwendet wird, vollständig von
der Kapillarwand gelöst. Das Einspülen von CE-Puffer vor jeder Trennung beschichtet
die Kapillare neu.
Spülschritte zur Lagerung der Kapillare
0.1 M NaOH : 2 min, 20 psi
5.1.1.3 Wasser
H2O : 10 min, 20 psi
H2O : 1 min, 5 psi
Wenn nicht anders beschrieben, wurde das mittels Millipore-Reinigungssystem (Milli-
Q, Eschborn, Deutschland) gereinigte Wasser benutzt.
5.1.1.4 CE-Trennpuffer (pH = 8.7)
Tris-Borat-Na2EDTA (TBE)-Puffer (pH = 8.3)
Es wurde eine Stammlösung von 0.445 M Tris-Borat und 10 mM Na2EDTA bei
einem pH von 8.3 hergestellt. Dazu wurde das Produkt No T7527 (Sigma-Aldrich,
Taufkirchen, Deutschland) in 1 l Wasser gelöst. Der hochkonzentrierte TBE-Puffer war,
aufbewahrt bei 4 ◦ C, über mehrere Monate haltbar.
Polyethylenoxid (PEO)-Lösung 0.5 %
0.2 g Polyethylenoxid (Mr=600.000; Sigma-Aldrich, Taufkirchen, Deutschland)
werden in 40 ml Wasser dispergiert, woraus sich ein 0.5 %iger Polymergehalt ergibt.
Das heterogene Gel wurde zur kompletten Lösung über Nacht bei 30 ◦ C gelagert.
Diese Lösung wurde über einen Zeitraum von einer Woche verwendet.
Für die Herstellung von 10 ml Trennpuffer wurden 17.5 µl TBE-Puffer und 250