Methoden zur Evaluation von Zytotoxizit¨at und Struktur ... - OPUS
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4.2 Kapillarelektrophoretische Methode <strong>zur</strong> Analyse intakter Mikroorganismen 109<br />
Abbildung 4.35: Analyse <strong>von</strong> N.<br />
cinerea-Proben nach einer Inkubationszeit<br />
<strong>von</strong> jeweils 24 h, gemessen<br />
an drei aufeinanderfolgenden<br />
Tagen. Für Trennpuffer,<br />
CE <strong>und</strong> Probenbedingungen, siehe<br />
Abbildung 4.25.<br />
ger darstellt. Ähnlich der Micrococcus-Spezies bildet er unregelmäßige Cluster, lieferte<br />
jedoch im Gegensatz zu M. luteus auch an drei aufeinanderfolgenden Tagen, abgese-<br />
hen <strong>von</strong> Verschiebungen in den Migrationszeiten, qualitativ reproduzierbare Ergeb-<br />
nisse (Abbildung 4.35).<br />
4.2.9.2 Trypanosoma brucei brucei<br />
Mit dem Aufkommen bioanalytischer Anwendungen in der CE wurden auch kapillar-<br />
elektrophoretische Untersuchungen an Erythrozyten [226, 289] <strong>und</strong> Trennungen <strong>von</strong><br />
Organellen aus lysierten Zellen [66, 130, 285] durchgeführt. Auch bei Trypanosomen<br />
(Abschnitt 1.1.2), die mit einem Durchmesser <strong>von</strong> 10 µm noch im Größenbereich<br />
<strong>von</strong> Erythrozyten lagen, gaben ihre negative Oberflächenstruktur <strong>und</strong> ihre gelunge-<br />
ne Field-Flow-Fraktionierung [103] Hinweise auf eine mögliche kapillarelektrophore-<br />
tische Anwendung. In einem ersten Versuch wurden mit der für Bakterien optimierten<br />
CE-Methode die Trypanosomen-Spezies T. brucei brucei analysiert. Nach dem Reini-<br />
gungsprozess wurden die Trypanosomen durch sanftes Pipettieren in Puffer suspen-<br />
diert <strong>und</strong> auf einen OD600-Wert <strong>von</strong> 0.5 eingestellt. Eine mikroskopische Überprüfung<br />
der Zellsuspensionen zeigte, dass bereits die Zellpräparation zum Lysieren der Trypa-<br />
nosomen geführt hat - möglicherweise aufgr<strong>und</strong> dem im Puffer fehlenden, aber le-<br />
bensnotwendigen Nährstoff Glukose oder ungünstiger Osmolarität. Dennoch wurde<br />
die CE-Analyse <strong>von</strong> zwei unabhängigen Zellsuspensionen durchgeführt. Die Elektro-<br />
pherogramme in Abbildung 4.36 zeigen zwar nicht das Peak-Muster intakter Trypano-<br />
somen, doch konnten die verschiedenen Zellbestandteile mit guter Auflösung <strong>von</strong>ein-<br />
ander getrennt werden. Ebenfalls wurde eine relativ gute Reproduzierbarkeit erreicht,<br />
obgleich in den jeweiligen Elektropherogrammen nicht alle Komponenten detektier-<br />
bar waren. Ähnlich der M. luteus-Analyse könnten auch hier statistische Imperfektio-<br />
nen (Abschnitt 4.2.7.4) die Ursache sein. Eine gleichzeitige mikroskopische Detektion
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