Methoden zur Evaluation von Zytotoxizit¨at und Struktur ... - OPUS

68 4. Ergebnisse und Diskussion
Abbildung 4.3 zeigt die entsprechenden Dosis-Wirkungs-Kurven im Konzentrations-
bereich zwischen 100 µM und 10 pM. Aus diesen wurden die entsprechenden ED50-
Werte mittels linearer Interpolation berechnet und mit den in der Literatur dokumen-
tierten Ergebnissen verglichen (Tabelle 4.1). Die Literaturwerte müssen kritisch be-
trachtet werden, denn aufgrund der vielen Möglichkeiten Zytotoxizität zu bestimmen,
streuen sie über einen breiten Wirkbereich. Die eigens ermittelten Ergebnisse liegen
jedoch akzeptabel im dokumentierten Bereich und korrespondieren sehr gut mit den
Ergebnissen aus dem Arbeitskreis Steverding in Norfolk (Eflornithin: ED50=11.5 µM,
Pentamidin-diisethionat: ED50=0.0025 µM, Suramin: ED50=0.36 µM), womit die Rich-
tigkeit der Durchführung des Testverfahrens bestätigt ist. Die fünf zur Verfügung ste-
henden Arzneistoffe dienten während des gesamten Projektes als Referenzsubstanzen
und wurden von Zeit zu Zeit zur Kontrolle der Testung und der Protozoenkultur ein-
gesetzt. Dadurch konnten Fehler in der Routine und mögliche Mutationen und Ver-
unreinigungen der Zellkulturen schnell erkannt und die Richtigkeit des Verfahrens
gewährleistet werden. Da neben der Richtigkeit der Methode auch die Reproduzier-
barkeit gegeben war - die Streuung der berechneten ED50 lag unterhalb der für Bio-
tests üblichen 30 % [216] - waren die beiden wichtigsten Voraussetzungen zum Einsatz
des AlamarBlue-Tests zur Reihenuntersuchung der Zytotoxizität von Substanzen auf
Trypanosomen erfüllt.
4.1.3.3 Etabliertes Testsystem
18
17
6
7
5
8
O
10
9
O
4
N
H 1
Abbildung 4.4: Antidesmon
3 O
2
Routinemessungen zeigten jedoch bald Grenzen
des Testsystems. So wiesen einige Testsubstan-
zen ein ausreichendes REDOX-Potenzial auf (<
+380 mV), um Resazurin zum Resorulfin zu re-
duzieren. Entdeckt wurde diese Fähigkeit an den
Strukturabkömmlingen des Antidesmon. Anti-
desmon ist ein pflanzliches Alkaloid, welches
1996 erstmals isoliert wurde und aufgrund seiner
Struktur und seines Syntheseweges als erster Re-
präsentant einer neuen Klasse von Alkaloiden gilt [40, 44]. Durch spektroskopische
Untersuchungen und Derivatisierungen wurde die Struktur als 3-Methoxy-2-methyl-
5-n-octyl-1,5,6,7-tetrahydro-chinolin-4,8-dion aufgeklärt [40]. Interesse an dieser Struk-
turgruppe weckte vor allem seine hohe Aktivität gegenüber Trypanosoma cruzi, dem
Erreger der Chagas-Krankheit, seine schwache Wirksamkeit gegen Leishmania donova-
ni und sein bisher unbekannter Wirkmechanismus [117]. Eine Wirksamkeit gegenüber
einer Trypanosoma brucei-Spezies konnte bisher zwar nicht gezeigt werden, dennoch
wurden die in Abbildung 4.6 dargestellten Strukturabkömmlinge des Antidesmon auf
ihre Wirksamkeit gegenüber Trypanosoma brucei brucei getestet. Auf den ersten Blick