Methoden zur Evaluation von Zytotoxizit¨at und Struktur ... - OPUS

4.2 Kapillarelektrophoretische Methode zur Analyse intakter Mikroorganismen 107
Abbildung 4.32: Analyse einer
P. fluorescens-Probe nach
einer Inkubationszeit von 24 h.
Nach Waschung erfolgte die
Resuspendierung in Trennpuffer
mittels einminütigem Vortexen
in einer Konzentration von 0.5
OD600. Für Trennpuffer und CE-
Bedingungen, siehe Abbildung
4.21.
Abbildung 4.33: Analyse einer P.
fluorescens-Probe nach einer Inkubationszeit
von 8 h, 19 h und
30 h, aus der gleichen Zellkultur.
Nach Bakterienernte erfolgte
Waschung und Resuspendierung
in Trennpuffer unter sanftem
Pipettieren zu einer Konzentration
von 0.5 OD600. Für Trennpuffer
und CE-Bedingungen, siehe
Abbildung 4.21.
Elektropherogramm. Eine mikroskopische Analyse der Bakterienprobe gab Aufschluss
über die Ursache. Es zeigten sich teilweise lysierte Bakterienzellen und abgerissene
Ketten. Offensichtlich musste eine sanftere Vorgehensweise in der Probenpräparation
gefunden werden. Durch Einsatz von Pasteurpipetten gelang eine sanfte Resuspen-
dierung der von Nährmedium gereinigten Zellkultur in Trennpuffer und führte zu
einem charakteristischen Peakmuster mit guter Reproduzierbarkeit (Abbildung 4.33).
Ähnlich der M. luteus-Studie wurde auch bei P. fluorescens der Einfluss verschiedener
Inkubationszeiten auf den elektrophoretischen Fingerabdruck untersucht. Wie in Ab-
bildung 4.14 zu sehen, ist die stationäre Phase nach 18 h erreicht. Um unterschiedliche
Wachstumsstadien analysieren zu können, wurde nach einer Inkubationszeit von 8 h,
19 h und 30 h jeweils eine Bakterienprobe vermessen. Dadurch war ein Zustandsbe-
reich von der exponentiellen Phase bis weit in die stationäre Phase hinein abgedeckt.
Die jeweiligen Elektropherogramme in Abbildung 4.33 zeigten in diesem Zeitfenster
qualitativ keine signifikanten Änderungen.
Auch bei S. vestibularis gelang die Anwendung der entwickelten CE-Methode nur un-