Methoden zur Evaluation von Zytotoxizit¨at und Struktur ... - OPUS

66 4. Ergebnisse und Diskussion
4.1.3.1 Lösungsmittel
Die AlamarBlue-Methode sollte zur Testung vieler verschiedener Substanzklassen an-
gewandt werden. Dazu war es notwendig zunächst die einzusetzenden Lösungsmit-
tel DMSO, EtOH und 0.1 M NaOH auf ihre zytotoxische Wirkung zu untersuchen
und mögliche Reaktionen mit AlamarBlue, die zu spektralen Verschiebungen führen
können, auszuschließen. In Abbildung 4.2 sind die gemessenen Differenzabsorption-
en inokulierter Trypanosomenkulturen unter Zusatz verschiedener Lösungsmittelkon-
zentrationen in Bezug auf den Messwert einer Kontrollsuspension (Trypanosomen-
kultur ohne Lösungsmittelanteil) in einem Dosis-Wirkungs-Diagramm aufgetragen.
Während 0.1 M NaOH selbst bei 10 %igem Anteil keine Auswirkung auf die Zellpro-
liferation zeigt, führen EtOH und DMSO ab einer Konzentration von 2.5 % zu einer
nahezu vollständigen Hemmung des Zellwachstums. In Anwesenheit eines 1 %igen
Lösungsmittelanteils bleibt die Zellproliferation bei EtOH unbeeinflusst. Bei DMSO
dagegen werden nur 60 % des natürlichen Wachstums erreicht. Eine weitere Reduktion
des Lösungsmittelanteiles war jedoch aufgrund der teilweisen schlechten Löslichkeit
der Testsubstanzen nicht möglich, so dass auch unter Verwendung von DMSO, die
Zytotoxizitätsmessung mit 1 %igem Lösungsmittelanteil durchgeführt wurde. Rein
rechnerisch betrachtet, bringt dies keine Nachteile mit sich, denn die Zytotoxizität
wird stets in Bezug auf eine lösungsmittelenthaltende Positivkontrolle ermittelt. Ei-
ne Verstärkung der antitrypanosomalen Wirkung der Testsubstanzen ist jedoch nicht
auszuschließen. Hinweise auf Interaktionen zwischen AlamarBlue und verschiedenen
Lösungsmitteln und dadurch Verschiebungen seiner Absorptionsbanden ähnlich der
Solvatochromie konnten nicht gefunden werden.
Abbildung 4.2: Dosis-Wirkungs-
Diagramme verschiedener Lösungsmittel
für den Teststamm
Absorbance [% of control]
140
120
100
80
60
40
20
0
0.1 M NaOH
0 2 4 6 8 10
Trypanosoma brucei brucei. Concentration [%]
DMSO
EtOH