Methoden zur Evaluation von Zytotoxizit¨at und Struktur ... - OPUS

122 4. Ergebnisse und Diskussion
Abbildung 4.43:
” Vitalitätskurven”
von P. fluorescens in
Abhängigkeit unterschiedlicher
Propidiumiodid-Konzentrationen.
Die Bakteriensuspensionen
enthalten 1.5 x 107 Zellen/ml in
unterschiedlichen lebend/tot-
Verhältnissen und wurden mit
SYTO9 in einer Konzentration
von 1.67 µM gesättigt. Gemessen
wurde am FMR bei einer Anregungswellenlänge
von 488 nm
und dualer Emission bei 520 nm
ratio of green/red fluorescence
4.0
3.5
3.0
2.5
2.0
1.5
Prop.= 1 µ M
Prop.= 10 µ M
Prop.= 100 µ M
1.0
0 20 40 60 80 100
und 655 nm. percentage of live cells
Abbildung 4.44: ” Vitalitätsgeraden”
von P. fluorescens und S. vestibularis
aus der Mittelung über
vier Wiederholexperimente. Die
Zellmarkierung von 1.5 x 10 7
Zellen/ml erfolgte mit 1.67 µM
SYTO9 und 10 µM Propidiumiodid.
Gemessen wurden am
FMR bei einer Anregungswellenlänge
von 488 nm und dualer
Emission bei 520 nm und
ratio of green/red fluorescence
7
6
5
4
3
2
P. fluorescens
S. vestibularis
0 20 40 60 80 100
655 nm. percentage of live cells
Für eine lineare Korrelation zwischen grün/rotem Fluoreszenzverhältnis und dem An-
teil lebender Bakterienzellen erwies sich für eine Bakteriensuspension von P. fluorescens
und S. vestibularis mit einer Zellkonzentration von 1.5 x 10 7 Zellen/ml die Markierung
mit 1.67 µM SYTO9 und 10 µM Propidiumiodid als geeignet. Die Markierung der Zel-
len erfolgte nach einer Inkubationszeit von 15 Minuten unter Lichtausschluss.
Die entsprechenden ” Vitalitätsgeraden” von P. fluorescens und S. vestibularis sind in
Abbildung 4.44 dargestellt. Gemittelt über vier unabhängige Experimente (d. h. an
verschiedenen Tagen durchgeführt) ergaben sich für die Korrelationsfunktion f(x) =
ax + b die folgenden Gleichungen und Bestimmtheitsmaße:
P. fluorescens : f(x) = 0.0152 · x + 1.3879, R 2 = 0.999
S. vestibularis : f(x) = 0.0511 · x + 2.0985, R 2 = 0.991
Die Streuungen der einzelnen Messwerte sind als Fehlerbalken eingezeichnet und er-
geben eine relative Standardabweichung von ≤ 8 % für P. fluorescens und ≤ 4 % für S.