Methoden zur Evaluation von Zytotoxizit¨at und Struktur ... - OPUS

110 4. Ergebnisse und Diskussion
Abbildung 4.36: Kapillarelektrophoretische
Trennung
trypanosomaler Zellbestandteile
aus zwei unterschiedlichen
Proben, gemessen am gleichen
Tag. Für Trennpuffer, CE- und
Probenbedingungen, siehe
Abbildung 4.33.
könnte zeigen, ob es sich bei den detektierten Signalen tatsächlich um Zellorganellen
handelt, wodurch die Aufklärung von Angriffspunkten neuer Wirkstoffe über Fluo-
reszenzmarkierung kapillarelektrophoretisch möglich würde.
4.2.10 Trennung verschiedener Bakterienstämme
Parallelisierung ist das Schlagwort für High-Throughput-Screening-Verfahren. Zu sei-
ner Realisierung bzw. zumindest zur Steigerung des Durchsatzes der bisherigen CE-
Methode sollten die drei Bakterienspezies M. luteus, P. fluorescens und S. vestibularis
in einem Elektropherogramm von einander getrennt werden. Dadurch sollte es später
möglich sein, die Toxizität von Testsubstanzen auf alle drei Erreger simultan zu unter-
suchen. In Abbildung 4.24 wurde bereits gezeigt, dass verschieden große Zellagglome-
rate mittels Ultraschallbehandlung in Einzelzellen separiert werden können, wodurch
die Voraussetzung für die elektrophoretische Parallelisierung verschiedener Bakteri-
enspezies gegeben ist. Mittels optimierter CE-Methode und 1-minütiger Ultraschall-
behandlung gelang die Separation der drei Bakterienarten (siehe Abbildung 4.37). Die
injizierte Probe enthielt die einzelnen Komponenten in gleichem Anteil und wurde auf
eine Gesamtzellzahl von 0.5 OD600 eingestellt. Wie das Elektropherogramm zeigt, sind
in der Zellsuspension jedoch trotz Ultraschallbehandlung zu einem geringen Anteil
Zellagglomerate und -ketten vorhanden, die auch mit Hilfe anderer Dispergierverfah-
ren, wie z. B. unter Zusatz geringer Mengen von Tween 80, nicht vereinzelt werden
konnten. Dennoch gelang mittels der einzelnen Referenzbakterien bzw. Referenzmi-
schungen die Identifizierung der einzelnen Peaks im Elektropherogramm. Aufgrund
der geringen elektrophoretischen Unterschiede zwischen P. fluorescens und S. vestibu-
laris und der möglichen Schwankungen in der Migrationszeit, wird eine endgültige
Zuordnung dieser Stämme erst durch simultane Mikroskopie des Detektionsfensters
möglich (dieses Equipment stand uns nicht zur Verfügung).