Methoden zur Evaluation von Zytotoxizit¨at und Struktur ... - OPUS

3.4 Kapillarelektrophorese 47
3.4.1.2 ”Sample stacking”
Die Probenaufgabe ist aufgrund der kurzen Injektionszeiten in Bezug auf die Repro-
duzierbarkeit der Ergebnisse ein kritischer Faktor. Längere Injektionszeiten und damit
größere injizierte Probenvolumina führen jedoch durch Volumenüberladung in der
Kapillare sehr schnell zu Peakverzerrung und Auflösungsverlust. Man versucht so-
mit einerseits möglichst hohe Probenvolumina aufzugeben und andererseits die auf-
gegebene Probenzone zu “schärfen”, d. h. aufzukonzentrieren und damit Peakverzer-
rungen entgegenzuwirken. Letzteren Vorgang bezeichnet man als “sample stacking”.
Das häufigste angewandte Verfahren ist das “electro-stacking” [87]. Dieses Verfahren
nutzt Unterschiede in der Leitfähigkeit zwischen Trennpuffer und Probenlösung. Da-
bei versucht man die Probe aus einer rein wässrigen Lösung zu injizieren, d. h. aus
einer Lösung mit geringer Leitfähigkeit und hohem Widerstand. Nach der Injektion
wird die Probe somit zunächst bis zum Erreichen der Puffergrenzfläche in einer hohen
Feldstärke beschleunigt und wandert dann im Trennpuffer bei niedrigerer Feldstärke
weiter. Durch das Abbremsen der Proben beim Eintritt in den Pufferbereich werden
die Proben aufkonzentriert.
3.4.1.3 Detektor
In der Mehrzahl der Fälle erfolgt die Detektion der getrennten Teilchen über UV/VIS-
Absorptionsmessungen. Ein großer Nachteil ist jedoch die geringe Empfindlichkeit
der Methode. Da sich die Extinktion proportional zur Schichtdicke verhält (Abschnitt
3.3.1), die in diesem Fall nur einige µm beträgt, liegt die Detektionsgrenze norma-
lerweise bei 10 −8 M [179]. Mit einem Laser-induzierten-Fluoreszenz-Detektor (LIF-
Detektor) sind dagegen Nachweisgrenzen im Bereich einiger Yoktomol und Zeptomol
(10 −21 mol und 10 −24 mol) keine Seltenheit [16, 95].
3.4.1.4 Auflösung
Die Auflösung (resolution, Rs) ist ein Maß für die Qualität einer Trennung und je
besser die Trennung, um so zuverlässiger ist das Analysenergebnis [124, 162]. Ab ei-
ner Auflösung von 1.5 gelten zwei Peaks als basisliniengetrennt voneinander. In die
Auflösung fließen zwei Faktoren ein:
• Die Peak-zu-Peak-Trennung, d. h. die Selektivität. Hier wird der Abstand zweier
Peak-Maxima berechnet und
• Die Trennleistung, welche durch die Breite der Peaks bestimmt und als Anzahl
N der theoretischen Böden pro Meter berechnet wird. Je schmaler ein Peak desto
höher ist die Trennleistung.