Methoden zur Evaluation von Zytotoxizit¨at und Struktur ... - OPUS

4.2 Kapillarelektrophoretische Methode zur Analyse intakter Mikroorganismen 93
Pufferbezeichnung Ionenstärke Tris-Borat Na2EDTA
[mM] [mM] [mM]
A 0.069 0.11 0.0025
B 0.349 0.56 0.0125
C 0.486 0.78 0.0175
D 0.693 1.11 0.0250
E 1.041 1.67 0.0375
F 1.390 2.22 0.0500
G 1.733 2.78 0.0625
H 2.083 3.34 0.0750
I 2.426 3.89 0.0875
Abbildung 4.18: Auswirkung
verschiedener TBE-Puffer-Konzentrationen
(A-I) auf den EOF.
Als EOF-Marker wurde eine
0.00005% Benzylalkohol enthaltende
Pufferlösung verwendet.
Für CE-Bedingungen siehe Abbildung
4.17.
Tabelle 4.5: Definition der in Abbildung 4.18 verwendeten TBE-Trennpuffer
tionsbereich lag somit bei einer Ionenstärke zwischen 0.069 mM und 0.486 mM, d. h.
zwischen Puffer A und C. Nachfolgend wurde der Einfluss der drei verschiedenen Puf-
ferkonzentrationen (A, B und C) auf die Trennung von M. luteus getestet (Abbildung
4.19). Die Pufferlösung mit der höchsten Verdünnung (Puffer A) führte zu einer einzi-
gen breiten Bande, die vermutlich durch das Platzen von Zellen aufgrund zu geringer
Ionenstärke des verwendeten Trennpuffers bedingt ist. Bei Erhöhung der Pufferkon-
zentration zeigten die Elektropherogramme einige sehr schmale Signale mit zunächst
schlechter Auflösung (Puffer B), welche durch Einsatz der dritten Pufferlösung (Puf-
fer C) mit 0.78 mM Tris-Borat und 0.018 mM Na2EDTA verbessert werden konnte.
Diese Pufferlösung erwies sich als optimal für eine Trennung unterschiedlich großer
Agglomerate, zumal eine hohe Ionenstärke wie z. B. bei Puffer I zu einer erheblichen
Verlängerung der Migrationszeit führte und kein Signal unter 40 Minuten beobachtet