Methoden zur Evaluation von Zytotoxizit¨at und Struktur ... - OPUS

174 5. Experimenteller Teil
zu achten, dass jede Verdünnung den gleichen Anteil Lösungsmittel enthielt. Dazu
wurde die erste Verdünnungsstufe mit reinem Medium, alle weiteren mit Medium
unter Zusatz von 10 % Lösungsmittel hergestellt. Unmittelbar vor der Testung wurden
200 µl jeder Verdünnung zubereitet.
5.2.4 AlamarBlue
AlamarBlue wurde als Resazurin-Natriumsalz von Sigma-Aldrich, Taufkirchen,
Deutschland bezogen. Es handelt sich dabei um die reduzierte Form des REDOX-
Indikators AlamarBlue. Für die Anwendung im Zytotoxizitätstest wurden 11 mg
Resazurin-Na in 100 ml 0.9 % NaCl gelöst. Bei 4 ◦ C aufbewahrt, war die Lösung über
mehrere Wochen stabil.
5.2.5 Durchführung des Zytotoxizitätstests
1 2 3 4-11
Blind- neg. pos. Testsubstanz
wert Kontrolle Kontrolle 100 µM - 10 pM
A M: 180 M: 180 M: 160 M: 160
ML: 20 A1: 20 ML: 20 A1: 20 - A8: 20
T: 20 T: 20
B M: 180 M: 180 M: 160 M: 160
ML: 20 A1: 20 ML: 20 A1: 20 - A8: 20
T: 20 T: 20
C M: 180 M: 180 M: 160 M: 160
ML: 20 B1: 20 ML: 20 B1: 20 - B8: 20
T: 20 T: 20
D M: 180 M: 180 M: 160 M: 160
ML: 20 B1: 20 ML: 20 B1: 20 - B8: 20
E . . .
T: 20 T: 20
. . . Substanz C
. . .
Tabelle 5.1: Pipettierschema des Zytotoxizitätstests an Blutstromformen von Trypanosoma brucei brucei.
M=Medium; ML=Medium mit 10 % Lösungsmittelanteil; T=Trypanosomensuspension (10 5 Zellen/ml);
A/B1-A/B8=Arbeitslösungen der Testsubstanzen A-B. Die Zahlen in der Tabelle sind in µl angegeben.
In 96-Mikrotiterplatten wurden 20 µl der Arbeitslösungen 1-8 in 160 µl vorge-
legtes Baltz-Medium pipettiert und anschließend 20 µl einer Trypanosomensus-