Methoden zur Evaluation von Zytotoxizit¨at und Struktur ... - OPUS

166 5. Experimenteller Teil
ihrer Fähigkeit in lebende Zellen einzudringen. SYTO9 färbt lebende Zellen mit intak-
ter Membran grün, während Propidiumiodid tote Zellen mit geschädigter Membran
rot färbt.
5.1.7 Proben
5.1.7.1 Antibiotika-Lösungen
Stammlösungen: 10 mM Stammlösungen verschiedener Referenz-Antibiotika wurden
in geeigneten, möglichst nicht-toxischen Lösungsmitteln und damit bevorzugt in Was-
ser hergestellt. Wässrige Lösungen wurden mit Membranfiltern der Porengröße von
0.2 µm steril filtriert. Zur Verminderung von Aktivitätsverlust durch Zersetzung der
Proben empfiehlt sich eine Lagerung bei -30 ◦ C.
Ciprofloxacin (Bayer AG, Leverkusen, Deutschland) : H2O
Vancomycin-HCl (Ratiopharm, Ulm, Deutschland) : H2O
Ampicillin-Na (Pfizer Pharma GmbH, Karlsruhe, Deutschland) : H2O
Ofloxacin (Hoechst, Frankfurt, Deutschland) : 0.1 M NaOH
Arbeitslösungen: Die Arbeitslösungen im Konzentrationsbereich 1 mM bis 1 µM er-
gaben sich aus den Stammlösungen durch serielle 1:10-Verdünnung mit den entspre-
chenden Lösungsmitteln. 200 µl jeder Verdünnung wurden unmittelbar vor der Te-
stung zubereitet.
5.1.7.2 Bakterien
5.1.7.2.1 Bakterien-Stämme
Die bakteriologischen Messungen mittels Kapillarelektrophorese, NMR und Fluores-
zenzspektroskopie wurden an den folgenden fünf Bakterien-Stämmen durchgeführt:
• Aerobier
Pseudomonas fluorescens (DSM-No 50090; DSMZ*, Braunschweig, Deutschland)
Micrococcus luteus (DSM-No 20030; DSMZ*, Braunschweig, Deutschland)
Neisseria cinerea (DSM-No 4630; DSMZ*, Braunschweig, Deutschland)
• Anaerobier
Escherichia coli (Top 10, Institut für Biotechnologie, Universität Würzburg,
Deutschland)
• Fakultativer Anaerobier
Streptococcus vestibularis (DSM-No 5636; DSMZ*, Braunschweig, Deutschland)
*DSMZ=Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen