Methoden zur Evaluation von Zytotoxizit¨at und Struktur ... - OPUS

5.2 Zytotoxizitätstest an Blutstromformen von Trypanosoma brucei brucei 171
zum Absterben der Zellen. Der Zytotoxizitätstest wurde hingegen in Abwesenheit von
Phenolrot durchgeführt aufgrund der spektralphotometrischen Auswertung des Toxi-
zitätseffektes. Zur Herstellung der Baltz-Medium-Basis-Lösungen wurden die nach-
folgenden Substanzen in 50 ml MEM-Medium (ohne Phenolrot bzw. mit Phenolrot)
gelöst, der pH auf 7.5 eingestellt, anschließend der Ansatz steril filtriert und mit MEM-
Medium unter Zusatz von 5 ml nicht-essenzieller Aminosäuren (NEAA, 100x, Gibco,
Karlsruhe, Deutschland) auf 500 ml ergänzt.
HEPES : 3 g
Glukose-Monohydrat : 500 mg
Na-Pyruvat : 110 mg
Hypoxanthin : 7 mg
Thymidin : 2 mg
Adenosin : 10.7 mg
Bathocuproninsulfonat : 14.1 mg
L-Gluthamin : 146 mg
Alle Substanzen wurden von Roth, Karlsruhe, Deutschland bezogen. Die Baltz-
Medium-Basis-Lösungen waren gelagert bei 5 ◦ C über mehrere Wochen stabil.
5.2.1.2 Baltz-Medium zur Kultivierung
Das Baltz-Medium zur Kultivierung wurde nach folgender Vorschrift hergestellt:
Baltz-Medium-Basis-Lösung : 40 ml
β-Mercapto-Stammlösung : 0.4 ml
Penicillin/Streptomycin* : 0.4 ml
Inaktiviertes fötales Rinderserum : 8 ml
Es sollte bei 5 ◦ C aufbewahrt nicht länger als zwei Wochen verwendet werden.
Inaktiviertes fötales Rinderserum:
Das Rinderserum (Biochrom, Berlin, Deutschland) war in 500 ml Flaschen erhältlich.
Es wurde steril filtriert in zehn 50 ml Plastikröhrchen aliquotiert und bei -30 ◦ C
aufbewahrt. Vor Gebrauch erfolgte nach Auftauen eines 50 ml Aliquotes bei 37 ◦ C
Inaktivierung des Rinderserums im Wasserbad bei 56 ◦ C für 30 Minuten.
β-Mercaptoethanol-Stammlösung:
β-Mercaptoethanol 50 mM* : 4 ml
H2O, bidestilliert, Ampuwa : 6 ml
*Substanzen wurden von Biochrom, Berlin, Deutschland bezogen.