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5 Ergebnisse Abbildung 5.6: Postulierter Abbauweg von Ethylenglycol zu Glyoxylsäure in P. putida KT2440, GN259 und JM37. Bei der Analyse des Stammes P. putida JM37 wurden einige der hier angegebenen Proteine aufgrund von Homologien identifiziert. ???: Es konnte kein passendes Enzym für die entsprechende Reaktion identifiziert werden. 92
5.1 Untersuchungen zum Abbau von Ethylenglycol drogenase PedI, in GN259 die Aldehyd-Dehydrogenase PP_0545 unter EG induziert (Tabelle 5.2). Die Regulation aller in den einzelnen Experimenten identifizierten Spots sowie die dazugehörigen Gelbilder sind im Anhang dieser Arbeit zu finden. Durch die Analyse der Membranfraktion konnte das aus den 2D-DIGE-Experimenten gewonnene Bild vervollständigt werden (Tabelle 5.4). So zeigte sich, dass in allen drei Stämmen sowohl die Aldehyd-Dehydrogenase PedI als auch PP_0545 (bzw. entsprechende homologe Enzyme in P. putida JM37) unter Ethylenglycol induziert waren. Dabei wies PedI in allen Stämmen die stärkere Induktion auf. Auch die Alkohol- Dehydrogenase PedH war in der Membranfraktion von P. putida GN259 und JM37 unter Ethylenglycol deutlich induziert. In P. putida KT2440 konnte das Protein in der Membranfraktion nicht identifiziert werden. Es wurde jedoch in der 2D-DIGE-Analyse mit erweitertem pH-Bereich (IEF, pH 3-11) identifiziert. Zudem wurde in P. putida KT2440 und GN259 das PQQ-Biosyntheseprotein PqqC unter Ethylenglycol verstärkt exprimiert. Aufgrund dieser Daten wurde für alle drei Pseudomonas-Stämme der in Abbildung 5.6 dargestellte Abbauweg von Ethylengylcol zu Glyoxylsäure postuliert. Dabei ist auch die subzelluläre Lokalisation der einzelnen an diesem Weg beteiligten Enzyme von Bedeutung. Während es sich bei den beiden Alkohol-Dehydrogenasen PedE und PedH um periplasmatische Proteine handelt, sind die beiden Aldehyd-Dehydrogenasen PedI und PP_0545 dem Zytoplasma zuzuordnen (Quelle: Pseudomonas Genome Database). Dies wirft, neben der Frage des Transports von Glycolaldehyd bzw. Glycolsäure auch die Frage nach einem Enzym, welches die Oxidation von Glycolsäure zu Glyoxylsäure katalysiert, auf. Ein möglicher Kandidat hierfür wäre das in P. putida JM37 regulierte Enzym GlcD (PP_3745). Bei dem in allen untersuchten Stämmen unter EG induzierten hypthetischen Porin (PP_2662) könnte es sich zudem um ein für EG spezifisches Porin handeln. Die Acetat-Permease ActP wäre darüber hinaus ein möglicher Kandidat für den Transport von Glycolsäure über die innere Membran. Im weiteren Metabolismus von Glyoxylsäure unterscheiden sich P. putida KT2440 und GN259 deutlich von P. putida JM37. Während in P. putida JM37 alle drei postulierten Abbauwege (Gcl, GlcB und AceA) unter EG induziert waren, wurde in P. putida KT2440 lediglich der Abbauweg über AceA verstärkt exprimiert. Nach Behandlung mit GXS waren in P. putida JM37 Gcl und GlcB deutlich reguliert, während AceA keine Regulation zeigte (Abbildung 5.7 A). In P. putida KT2440 war auch hier lediglich AceA induziert (Abbildung 5.7 B). Zudem zeigte sich in P. putida KT2440 eine Induktion verschiedener Enzyme des Citratzyklus, darunter PP_4012 und SucA und KgdB. Neben den am Metabolismus von EG und GXS beteiligten Enzymen, war auch der Regulator PedR1 unter Ethylenglycol jedoch nicht unter Glyoxylsäure in P. putida 93
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Quantitative Proteomanalyse von Pse
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Veröffentlichungen Ein Teil der Er
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Inhaltsverzeichnis 4.2.3 Kultivieru
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Inhaltsverzeichnis 5.3.2 Analyse de
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Tabellenverzeichnis 5.16 Differenti
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1 Zusammenfassung Induktion der Fet
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2 Summary The main focus of this wo
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3 Einleitung 3.1 Systembiologie in
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3 Einleitung 1948). Beide Autoren b
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3 Einleitung schritt im Bereich der
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3 Einleitung Pyruvat zu Acetaldehyd
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3 Einleitung Wie auch bei der Herst
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3 Einleitung Pseudomonas putida KT2
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3 Einleitung schwierig. Substanzen,
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3 Einleitung 3.3.7 Labelfreie masse
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3 Einleitung 3.3.8 Selected reactio
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3 Einleitung weiter zu erhöhen, is
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4 Material und Methoden 4.1 Verwend
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Literatur Alban, Andrew, Stephen Ol
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Literatur bp inverted repeat sequen
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Literatur Inui, Masayuki, Masako Su
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Literatur Lovric, Josip (2011). Int
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Literatur comparative analysis of t
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Abkürzungsverzeichnis CE DC GeLCMS
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Eidesstattliche Versicherung Eidess
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Anhang Alle Tabellen und Abbildunge
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