Dokument 2.pdf - OPUS-Datenbank - Universität Hohenheim

6.3 Vanillin
aufgenommen wurden.
Einen Grund für die geringe Regulation von an der Biosynthese von Membranen beteiligten
Enzymen könnte auch in der Versuchsdurchführung liegen. Während Santos
et al. (2004) einen Phenol-Puls auf mit Succinat als C-Quelle kultivierte Zellen gaben,
erfolgte die Kultivierung unserer Zellen bereits in der Vorkultur mit Vanillin als einziger
Kohlenstoffquelle. Zum Zeitpunkt der Probenahme waren die Zellen und damit auch die
Membranen bereits an Vanillin adaptiert, womit kein erhöhter Bedarf an Membran-aufoder
umbauenden Enzymen bestand.
6.3.8 Export toxischer Substanzen über Efflux-Systeme
Auch wenn sich kein deutlicher Umbau der Membran unter Vanillin feststellen ließ,
waren verschiedene, bereits in anderen Studien identifizierte Efflux-Systeme unter dem
Einfluss von Vanillin induziert. Darunter befand sich auch das RND-Efflux-System
TtgABC. Roma-Rodrigues et al. (2010) fanden in P. putida KT2440 nach Behandlung
mit Phenol und Analyse des Membranproteoms mittels 2D-Elektrophorese eine Induktion
von TtgA und TtgC. Die in dieser Studie ebenfalls regulierten Proteine Ttg2A und
Ttg2C sowie das mutmaßliche Efflux-System PP_1516-PP_1517 zeigten in unseren
Versuchen jedoch keine Regulation oder wurden nicht identifiziert (Ttg2C).
Auch in Gegenwart von Toluol war (auf Transkriptomebene) in P. putida KT2440 eine
Induktion der Efflux-Systeme TtgABC, Ttg2A und PP_1516-PP_1517 zu beobachten
(Domínguez-Cuevas et al., 2006). Die in dieser Studie zusätzlich regulierten Transporter
PP_3349 und PP_3588 konnten im Rahmen dieser Arbeit nicht identifiziert werden.
In Bezug auf TtgABC ist auch dessen unterschiedliche Expression in verschiedenen
Pseudomonas-Stämmen als Reaktion auf verschiedene aromatische Lösungsmittel interessant.
Während TtgABC in P. putida KT2440 unter Phenol induziert war, war
dies in P. putida DOT-T1E nicht der Fall (Segura et al., 2003). In P. putida S12
wurde TtgABC unter Toluol sogar vermindert exprimiert (Wijte et al., 2011). Laut
Wijte et al. (2011) waren das in P. putida KT2440 nicht vorhandene Transportsystem
SrpABC (TtgGHI) sowie PP_1272 die einzigen unter dem Einfluss von Toluol induzierten
Transportsysteme in P. putida S12. Das potentielle Typ-1-Sekretionssystem
PP_1271-PP_1273 war auch in unseren Versuchen in P. putida KT2440 unter Vanillin
induziert. Die Induktion dieses Transportsystems unter 4-Hydroxybenzoat in P.
putida S12 palB1 könnte auf eine Funktion im Transport von 4-Hydroxybenzoat oder
verwandter Verbindungen auch in P. putida KT2440 hinweisen (Verhoef et al., 2010).
Eine Rolle des Efflux-Systems MexE, MexF, OprN im Rahmen der Lösungsmitteltoleranz
wurde von Santos et al. (2004) zwar vermutet, konnte aber bei der Analyse des
Membranproteoms nach Behandlung mit Phenol durch Roma-Rodrigues et al. (2010)
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