Dokument 2.pdf - OPUS-Datenbank - Universität Hohenheim

5 Ergebnisse
Tabelle 5.25: In den verschiedenen 1D-Fraktionierungs-Experimenten differentiell regulierte
Stressproteine. Proteine wurden als reguliert angesehen, wenn sie einen p-Wert < 0,05 und
eine Regulation um einen Faktor > 2 aufwiesen
Locus-Tag Gen Protein I vs.
I vs.
II vs.
Reg.
II
III
III
In
PP_0915 sodB superoxide dismutase NR NR NR
PP_1361 groEL chaperonin GroEL NR NR NR
PP_1623 rpoS RNA polymerase sigma factor RpoS NR 2,3 NR BuOH
PP_3095 chaperone-associated ATPase NR 4,5 7,9 BuOH
PP_4179 htpG heat shock protein 90 NR 2,2 2,1 BuOH
PP_4727 dnaK molecular chaperone DnaK NR NR NR
PP_4894 hfq RNA-binding protein Hfq NID 114,4 192,1 BuOH
NR: Nicht reguliert (Das Protein wurde aber in dem entsprechenden Vergleich identifiziert).
NID: Nicht identifiziert (Das Protein konnte nicht identifiziert werden).
Reg. In: Zustand, in welchem das Protein induziert war.
I vs. II, I vs. III, II vs. III: Regulation zwischen den angegebenen Steady-State Zuständen
5.3 Untersuchungen zum Vanillin-Metabolismus
Die in diesem Teilprojekt angestrebte Synthese von Vanillin sollte, wie bereits eingangs
erläutert, durch heterologe Expression von Genen aus E. coli in P. putida KT2440 erfolgen.
Aufgrund seiner zytotoxischen Eigenschaften stellt Vanillin, ähnlich wie Butanol,
für P. putida KT2440 einen Stressfaktor dar. Vanillin wird daher, wie andere Aromaten
auch, über verschiedene Mechanismen aus P. putida KT2440 eliminiert. Neben dem
Export von Vanillin kann dieses in P. putida KT2440 auch zu weniger toxischen Metaboliten
abgebaut werden. Hierbei kann Vanillin als alleinige Kohlenstoffquelle genutzt
werden. Da toxische Effekte mit der Erhöhung der Vanillinkonzentration zunehmen
und bei einer Vanillinkonzentration jenseits von 0,3% kein Wachstum mehr erfolgte,
wurde für die Anzucht der zu analysierenden Proben eine Vanillinkonzentration von
0,1% gewählt. Im Gegensatz zu den mit Butanol durchgeführten Experimenten, erfolgte
die Zugabe von Vanillin nicht als Puls, sondern wurde als einzige Kohlenstoffquelle
direkt im Medium gelöst. Ein Vorteil dieses Vorgehens war, dass Vanillin nicht in einem
zusätzlichen Lösungsmittel gelöst werden musste, was bei Vanillinkonzentrationen
jenseits von 1% erforderlich ist. Neben P. putida KT2440 wurde auch die Mutante P.
putida GN235 untersucht, welche für das Gen vdh (kodiert für das Enzym Vanillin-
Dehydrogenase) defizient war. Wie auch die von Overhage et al. (1999b) publizierte
vdh-defiziente Mutante des Stammes Pseudomonas sp. HR199, zeigte auch P. puti-
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