Dokument 2.pdf - OPUS-Datenbank - Universität Hohenheim
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6.1 Ethylenglycol und Glyoxylsäure<br />
Tabelle 6.1: Vergleich der Aminosäuresequenz der Proteine PedE, PedH, PedI und PedR1<br />
zwischen P. putida KT2440, P. putida U, P. aeruginosa und P. putida HK5.<br />
% Aminosäuresequenzidentität (Name) des homologen Proteins in :<br />
P. putida<br />
KT2440<br />
P. putida U P. aeruginosa<br />
PAO1<br />
P. putida HK5<br />
PedR1<br />
(PP_2665)<br />
PedE<br />
(PP_2674)<br />
PedH<br />
(PP_2679)<br />
PedI<br />
(PP_2680)<br />
91 (PedR1) 86 (ErbR) - - -<br />
98 (PedE) 84 (ExaA) 90 (ADH I) 38 (IIB) 73 (IIG)<br />
99 (PedH) 52 (ExaA) 53 (ADH I) 40 (IIB) 82 (IIG)<br />
97 (PedI) 88 (ExaC) - - -<br />
-: Keine Sequenz bekannt<br />
IIB:ADH IIB, IIG:ADH IIG<br />
Die Mutanten GN116 (∆PP_2674), GN104 (∆PP_2679) und GN127 (∆PP_2674,<br />
∆PP_2679) wurden, ähnlich wie bei Arias et al. (2008) von Yvonne Beck (Beck, 2012)<br />
auf ihr Wachstum in Gegenwart verschiedener Alkohole getestet. Hierbei zeigte sich ein<br />
deutlicher Unterschied zu den in P. putida U publizierten Daten (Arias et al., 2008),<br />
was die Umsetzung kurzkettiger (C 2 bis C 5 ) Alkohole betraf. Ethanol, Butanol und<br />
Pentanol wurden in der Mutante GN127 wesentlicher langsamer als im Wildtyp umgesetzt.<br />
Oktanol konnte nicht metabolisiert werden. In GN116 und GN104 konnten<br />
hingegen keine Unterschiede zum Wildtyp festgestellt werden. Im Hinblick auf Ethylenglycol<br />
war die Umsetzung in der Mutante GN127 ebenfalls drastisch reduziert, die<br />
verbliebene Aktivität und die Akkumulation von Oxalat waren vermutlich auf andere<br />
unspezifische Dehydrogenasen zurückzuführen (Mückschel et al., 2012). Bei der Umsetzung<br />
von Glyoxylsäure und Glycolsäure konnten keine Unterschiede zum Wildtyp<br />
festgestellt werden. Dies deutet auf eine Rolle der beiden Alkohol-Dehydrogenasen in<br />
den ersten Schritten des Ethylenglycol-Abbaus sowie eine Redundanz der beiden Enzyme<br />
in Bezug auf den Abbau verschiedener Alkohole in P. putida KT2440 hin. Zudem<br />
scheint sich das Substratspektrum von PedE und PedH aus P. putida U von dem Substratspektrum<br />
von PedE und PedH aus P. putida KT2440 zu unterscheiden (Arias et<br />
al., 2008).<br />
Neben der großen Sequenzidentität zu P. putida U zeigten die beiden Alkohol-Dehydrogenasen<br />
auch eine große Übereinstimmung mit der in P. aeruginosa beschriebenen<br />
Alkohol-Dehydrogenase ExaA (Rupp et al., 1988; Görisch et al., 1989) und den in P.<br />
putida HK5 beschriebenen Alkohol-Dehydrogenasen ADH I und ADH IIG (Toyama et<br />
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