Dokument 2.pdf - OPUS-Datenbank - Universität Hohenheim

5.3 Untersuchungen zum Vanillin-Metabolismus
da GN235 keine nennenswerten Wachstumsunterschiede zum Wildtyp. Abbildung 5.23
zeigt das Wachstum von P. putida KT2440 und P. putida GN235 in Gegenwart von 2
g/l Glucose bzw. 0,1% Vanillin. Sowohl der Wildtyp als auch die Mutante wuchsen
mit Vanillin als alleiniger Kohlenstoffquelle zu einer deutlich geringeren, finalen OD 600
(∼1,0) als mit Glucose (∼2.0). Das Erreichen dieser finalen OD 600 erfolgt zudem deutlich
später.
Abbildung 5.23: Wachstum von P. putida KT2440 und GN235 auf 2 g/l Glucose bzw. 0,1%
Vanillin.
Während die Kultivierung der mit Butanol behandelten Bakterien sowohl im Kolben als
auch im Fermenter in M12-BVT Medium erfolgte, fiel die Wahl für diesen Versuch auf
M12-BASF Medium. Nachdem in Schüttelkolben-Kulturen mit M12-BVT Medium eine
verstärkte Aggregatbildung beobachtet wurde und daher neben einer Beeinträchtigung
der OD 600 Messungen auch ein Einfluss auf die Proteinexpression nicht ausgeschlossen
werden konnte, erschien der Wechsel des Mediums an dieser Stelle sinnvoll. Da für diesen
Versuch keine Kultivierung im Bioreaktor durchgeführt wurde, musste außerdem
auf die Vergleichbarkeit der beiden Ansätze keine Rücksicht genommen werden. Bereits
die Vorkulturen wurden mit den in der Hauptkultur verwendeten Kohlenstoffquellen
(2 g/l Glucose, 0,1% Vanillin) in 50 ml M12-BASF Medium angezogen. Die Hauptkulturen
wurden auf eine OD 600 von 0,01 eingestellt, die Ernte der Zellen erfolgte bei einer
OD 600 von 0,6. Während die Analyse der aus P. putida GN235 gewonnenen Proben ausschließlich
mittels 2D-DIGE und der Analyse des Membranproteoms erfolgte, wurden
Proben aus P. putida KT2440 zusätzlich durch eine GeLCMSMS-Analyse untersucht.
Die Besprechung der unter Vanillin induzierten Proteine und Stoffwechselwege erfolgt
gemeinsam für alle durchgeführten Experimente in Abschnitt 5.3.4. Eine Liste aller in
den einzelnen Experimenten regulierter Proteine befindet sich im Anhang dieser Arbeit.
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