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5 Ergebnisse Abbildung 5.19: Regulation von Proteinen aus der Genregion zwischen PP_2662 und PP_2683 zwischen Steady-State I und Steady-State III in den verschiedenen durchgeführten 1D-Fraktionierungs-Experimenten. (blau) induziert in Steady-State III, (lila) nicht reguliert, (weiß) nicht identifiziert A) Regulierte Gene, B) Regulierte, möglicherweise mit dem Transport von Butanol assoziierte Proteine, C) Mit dem PedR1-Regulon assoziierte und regulierte Proteine, sowie deren vermutete regulatorische Verbindung. 124
5.2 Untersuchungen zum Butanol-Metabolismus β-Lactamase Domäne (Antibiotikaresistenz). Die Funktion von PP_2678 ist nicht bekannt. Auch das Porin PP_2662 sowie die PQQ-Biosyntheseproteine PqqB, PqqC, PqqE und PqqH zeigten unter Butanol eine deutliche Induktion. Wie Tabelle 5.16 zeigt, waren bis auf PedH alle Proteine der Region unter 7,5 g/l Butanol deutlich stärker als unter 0,75 g/l Butanol reguliert. Das Protein Acetyl-CoA Synthetase, welches zwar nicht in dieser Genregion liegt, aber mit dem PedR1-Regulon in Zusammenhang steht war unter Butanol ebenfalls induziert. Lipid-Metabolismus Generell zeigte sich unter Butanol eine Induktion verschiedener am Abbau von Fettsäuren beteiligter Enzyme. Wie die Anzahl regulierter Proteine in Abbildung 5.20 zeigt, waren dabei deutlich mehr Proteine zwischen Steady-State I und Steady-State III als zwischen Steady-State I und Steady-State II reguliert. So waren neben den an der Synthese von Butanoyl-CoA beteiligten Enzymen (PedE, PedI und PP_3553) auch Enzyme des nachfolgenden β-Oxidations-Weges sowie des Citratzyklus (s. nächster Abschnitt) induziert (Tabelle 5.17). So wurden die Enzyme Acyl- CoA-Synthetase (PP_3553), Acyl-CoA-Dehydrogenase (PP_3554), β-Ketothiolase ( PP_3754) und 3-Hydroxybutyryl-CoA Dehydrogenase (PP_3755) in Steady-State III verstärkt exprimiert. Das Enzym Enoyl-CoA-Hydratase war in keiner der durchgeführten Analysen reguliert. AcsA(PP_4487), welches als Acetyl-CoA-Synthetase beschrieben ist, könnte ebenfalls eine Rolle bei der Aktivierung von Butansäure zu Butanoyl- CoA spielen. Die verminderte Expression der Alkohol-Dehydrogenase PP_1816 sowie der nicht näher charakterisierten Acyl-CoA-Dehydrogenasen (PP_0368, PP_0370, PP_3638 und PP_ 4780) in Steady-State III, weisen auf die Spezifität der am Butanol-Abbau beteiligten und in Steady-State III induzierten Dehydrogenasen hin. Zudem zeigten sowohl die Teile des Leucin-Abbaus downstream von 3-Methylbutanoyl-CoA als auch Teile des 2-Methylisocitrat Zyklus eine unter Butanol verminderte Expression. Die Regulation beider Cluster ließe sich durch den unter Butanol im Vergleich zu Glucose geringeren Abbau verzweigtkettiger bzw. ungeradzahliger Fettsäuren erklären (Santos et al., 2009). Das beim Abbau ungeradzahliger Fettsäuren entstehende Proprionyl-CoA, kann über den 2-Methylisocitrat Zyklus in Succinat umgewandelt und weiter metabolisiert werden. Um das beim Abbau verzweigter Fettsäuren entstehende 3-Methylbutanoyl-CoA zu Acetoacetat abzubauen, werden einige Enzyme des Leucin-, Valin-, und Isoleucin Metabolismus benötigt. Offenbar werden diese beiden Abbauwege in der Gegenwart von Butanol reprimiert. An der Biosynthese von Fettsäuren beteiligte Enzyme waren im Rahmen der Ge- LCMSMS-Analysen nicht reguliert. In den 2D-DIGE-Analysen konnte jedoch AccB 125
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Quantitative Proteomanalyse von Pse
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Veröffentlichungen Ein Teil der Er
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Inhaltsverzeichnis 4.2.3 Kultivieru
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Inhaltsverzeichnis 5.3.2 Analyse de
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Abbildungsverzeichnis 3.1 Oxidation
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Abbildungsverzeichnis 5.39 Einteilu
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Tabellenverzeichnis 5.16 Differenti
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1 Zusammenfassung Induktion der Fet
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2 Summary The main focus of this wo
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3 Einleitung 3.1 Systembiologie in
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3 Einleitung 1948). Beide Autoren b
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3 Einleitung schritt im Bereich der
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3 Einleitung Abbildung 3.2: Glyoxyl
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3 Einleitung verschiedener Mechanis
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3 Einleitung Pyruvat zu Acetaldehyd
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3 Einleitung Wie auch bei der Herst
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3 Einleitung Pseudomonas putida KT2
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3 Einleitung schwierig. Substanzen,
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3 Einleitung werden die Zeit und da
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3 Einleitung definierten Massenbere
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3 Einleitung 3.3.4 Proteinidentifiz
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3 Einleitung Silberfärbung überle
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3 Einleitung 3.3.7 Labelfreie masse
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3 Einleitung 3.3.8 Selected reactio
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3 Einleitung weiter zu erhöhen, is
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4 Material und Methoden 4.1 Verwend
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4 Material und Methoden Tabelle 4.3
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4 Material und Methoden Bezeichnung
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4 Material und Methoden 4.5.2 Ident
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4 Material und Methoden 4.5.3.1 bes
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5 Ergebnisse Abbildung 5.1: Durchf
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5 Ergebnisse Spot gi Nummer Protein
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6 Diskussion in P. putida JM37 deut
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6 Diskussion al., 1995; Toyama et a
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6 Diskussion Wie bereits in den üb
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Literatur Alban, Andrew, Stephen Ol
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Literatur Chattopadhyay, Ava, Karin
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Literatur bp inverted repeat sequen
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Literatur Inui, Masayuki, Masako Su
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Literatur Lovric, Josip (2011). Int
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Literatur comparative analysis of t
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Literatur coding three quinoprotein
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Literatur Schmidt, Alexander, Josef
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Literatur Toyama, Hirohide, Zhi-Wei
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Literatur Wood J. M., W. A. und R.
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Abkürzungsverzeichnis CE DC GeLCMS
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Eidesstattliche Versicherung Eidess
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Anhang Alle Tabellen und Abbildunge
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