Aus dem Institut für Lebensmittelqualität und -sicherheit des

Eigene Untersuchungen
3.2.1.1 L. reuteri (S 24) und L. rhamnosus (S 25)
Bei S 24, Lactobacillus reuteri, und S 25, Lactobacillus rhamnosus, handelte es sich
um Produkt-Re-Isolate, isoliert aus probiotischen Milcherzeugnissen durch die
Universität für Bodenkultur Wien, Department für Lebensmittelwissenschaften und
-technologie, Abteilung Lebensmittelmikrobiologie und -hygiene, geliefert als
Kryokulturen.
Jeweils 200 µl verflüssigte Kryokultur wurden in 10 ml MRS-Bouillon (BI) überführt.
Die Bebrütung erfolgte im Anaerobiertopf für 24 h ± 2 h. Nach 24 h ± 2 h erfolgte eine
Überimpfung von 200 µl aus BI in 10 ml neue MRS-Bouillon (BII) und eine weitere
Bebrütung für 24 h ± 2 h. Nach 24 h ± 2 h wurden fraktionierte Ausstriche auf MRS-
Agarplatten (AI) im Doppelansatz durchgeführt und diese für 48 h ± 2 h bebrütet.
Nach 48 h ± 2 h wurden die Ansätze makroskopisch und nach Gramfärbung auch
mikroskopisch kontrolliert und jeweils eine Kolonie in neue MRS-Bouillon (BIII)
überimpft. Diese Bouillon (BIII) wurde 24 h ± 2 h bebrütet. Nach 24 h ± 2 h wurde die
Bouillon im Doppelansatz auf MRS-Agarplatten (AII) fraktioniert ausgestrichen und
für 48 h ± 2 h bebrütet. Nach 48 h ± 2 h wurden die Ansätze makroskopisch und
mikroskopisch kontrolliert. Die Stämme S 24 und S 25 wurden anschließend als
Reinkulturen in das Microbank-System nach Anweisung des Herstellers überführt.
Der Schraubverschluss des Microbank-Röhrchens wurde unter sterilen
Bedingungen geöffnet. Der im Röhrchen enthaltene Kryopuffer wurde mit Kolonien
aus der Reinkultur inokuliert. Das Inokulum sollte nach Microbank einem
McFarland Standard von 3 - 4 entsprechen. Anschließend wurde das Kryoröhrchen
fest verschlossen und 4- bis 5-mal durch Umdrehen gemischt. Durch den
Mischvorgang wurden die Organismen an die porösen Perlen gebunden. Der
überschüssige Kryopuffer wurde anschließend weitgehend abpipettiert, so dass die
Perlen weitgehend frei von Flüssigkeit waren. Anschließend wurde das Röhrchen
fest verschlossen und bei -80 °C ± 0,5 °C gelagert. Es wurden jeweils zwei solcher
Microbank-Röhrchen angefertigt.
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