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80 Eigene Untersuchungen Die nachfolgende Abbildung 5 gibt eine schematische Übersicht über die Isolierung und Kultivierung von Lactobacillus reuteri (S 24) und Lactobacillus rhamnosus (S 25). Abbildung 5: L. reuteri (S 24) und L. rhamnosus (S 25): Isolierung, 3.2.1.2 L. paracasei (S 26) 200 µl Kryokultur S 24 bzw. S 25 MRS-Bouillon (BI) MRS-Bouillon (BII) MRS-Agarplatte (AI) MRS-Bouillon (BIII) MRS-Agarplatte (AII) Microbank Kultivierung und Sicherung der Stämme S 26, Lactobacillus paracasei, wurde aus einem probiotischen Milcherzeugnis isoliert. Dabei handelte es sich um ein fermentiertes Getränk aus Magermilch mit dem Stamm Lactobacillus casei Shirota und laut Herstellerangaben folgenden
Eigene Untersuchungen Zutaten: Wasser, Magermilch, Glukosesirup, Zucker, Aroma, Lactobacillus casei Shirota. Für die Isolierung des Stammes S 26, Lactobacillus paracasei, wurde eine dezimale Verdünnungsreihe angelegt. Dazu wurden 90 ml NaCl-Pepton-Lösung mit 10 ml des probiotischen Milcherzeugnisses versetzt und homogenisiert. 1 ml aus diesem Ansatz entsprach einer Verdünnung von 10 -1 . 0,1 ml aus diesem Ansatz entsprachen einer Verdünnung von 10 -2 . Für die Herstellung der nächsthöheren Verdünnungsstufe wurde jeweils 1 ml der niedrigeren Verdünnungsstufe mit 9 ml NaCl-Pepton-Lösung versetzt und homogenisiert, usw. Es erfolgte eine Verdünnung bis 10 -7 . Jeweils 0,1 ml der sechs Verdünnungsstufen 10 -2 bis 10 -7 wurden im Doppelansatz auf eine MRS-Agarplatte (AI) pipettiert und ausgespatelt. Die Bebrütung erfolgte im Anaerobiertopf für 48 h ± 2 h. Nach 48 h ± 2 h wurden die Agarplatten makroskopisch und mikroskopisch hinsichtlich des Wachstums kontrolliert. Jeweils eine Kolonie wurde in 10 ml MRS-Bouillon (BI) überimpft und für 24 h ± 2 h bebrütet. Nach 24 h ± 2 h wurden fraktionierte Ausstriche im Doppelansatz auf MRS-Agarplatten (AII) angefertigt und für 48 h ± 2 h bebrütet. Eine Kontrolle des Wachstums erfolgte nach 48 h ± 2 h makroskopisch sowie mikroskopisch. Die Reinkultur des Stammes wurde in das Microbank-System, wie oben für S 24 und S 25 beschrieben, überführt. Es wurden jeweils zwei Microbank-Röhrchen angefertigt und diese dann bei -80 °C ± 0,5 °C gelagert. Die Abbildung 6 zeigt schematisch die Isolierung und Kultivierung von Lactobacillus paracasei (S 26). 81
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6 Schlussfolgerungen Schlussfolgeru
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7 Zusammenfassung Julia Nina Jähne
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