Untitled - Stiftung Tierärztliche Hochschule Hannover

3 Material und Methoden
3.2.5 Erregerdifferenzierung und –identifizierung
3.2.5.1 Makroskopische Identifizierung
Von den Selektivnährböden der jeweiligen Keimspezies wurden bis zu 5 typisch
aussehende Einzelkolonien mit einer Platinöse abgenommen, im „Drei-Ösen-
Ausstrich“ auf einen Columbia-Blut-Agar (Oxoid) subkultiviert und anschließend
entsprechend der Keimart bebrütet (bei 30°C oder bei 37°C).
Nach 24h wurde in der Reinkultur der Kolonien das für die jeweilige Keimart typische
Kolonieaussehen sowie - sofern typisch für die jeweilige Keimgruppe - die
ausgebildete Hämolysezone bewertet.
3.2.5.2 Gramfärbung und mikroskopische Identifizierung
Die Gramfärbung wurde folgendermaßen durchgeführt:
Nach Einreiben einer oder mehrerer Kolonien in einen Tropfen physiologischer
0,9 % Kochsalzlösung und Auftragen auf den Objektträger, wurde der Ausstrich
luftgetrocknet und hitzefixiert.
Für die Gramfärbung wurden maximal 24h alte Kulturen verwendet, da sich das
Färbeverhalten bei Alterung der Zellen verändern kann (BAUMGART 2006).
Das fixierte Präparat wurde zuerst 3 Minuten mit Karbolgentianaviolett
(Kristallviolett), anschließend für weitere 3 Minuten mit der Lugol-Lösung gefärbt.
Das Präparat wurde mit Ethanol sowie mit Wasser abgespült und mit der
Karbolfuchsinlösung (Safranin) für 30 Sekunden gegen gefärbt und nochmals mit
Wasser gespült.
Die mikroskopische Beurteilung erfolgte mit einem Lichtmikroskop bei 10x10 facher
Vergrößerung und unter Zuhilfenahme einer Ölimmersion.
Kriterien für die Beurteilung der einzelnen Bakterienstämme waren die Art der
Gramfärbung, die typische Gestalt, (die Größe) und die charakteristische Anordnung
der Bakterien zueinander.
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