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II. 1. Einleitung
Ende der ersten Förderperiode durch seinen Einfluss auf die aktuelle Forschung der
beteiligten Arbeitsgruppen gezeigt werden.
Die dafür benötigten doppelsträngigen RNAs werden auf der Basis verbesserter
Genmodelle durch eine PCR-basierte Strategie von der Arbeitsgruppe um Frank
Buchholz am MPI in Dresden hergestellt. Die Methodik, die dort für siRNAs zum
Einsatz in Säugerzellkultur entwickelt wurde, wurde für diese Zwecke angepasst
(Kittler et al., 2005; Kittler et al., 2007). Die Genmodelle für die RNA-Synthesen
werden durch Kombination bereits vorhandener und neu zu erstellender cDNA-
Sequenzen sowie der vorhandenen Genmodelle der Genomannotation
(http://beetlebase.org/) in Zusammenarbeit mit Mario Stanke und Burkhard Morgens-
tern (Abt. f. Bioinformatik, Göttingen) generiert. Diese Kollektion von dsRNAs (iBeet-
le-Library) wird kommerziell zu erwerben sein und wird so die schnelle Durchführung
weiterer Screenprojekte mit spezifischen Fragestellungen ermöglichen.
Ebenfalls in Zusammenarbeit mit der Abteilung für Bioinformatik in Göttingen wird
eine Online-Datenbank für iBeetle entwickelt (iBeetle-Base). Sie soll den Screenern
während der Screening-Phase die direkte Eingabe der Beobachtungen erlauben und
diese durch Vorgabe von Textbausteinen standardisieren. Nach Abschluss des
Screens soll iBeetle-Base öffentlichen Zugriff auf die Ergebnisse ermöglichen und
langfristig eine Genfunktions-zentrierte Datenbank und wichtige Tribolium-Ressource
werden.
1.4.2. „Enhancer trap“-Stämme erlauben die Detektion zusätzlicher
Phänotypen
Um im Verlauf des iBeetle-Screens embryonale und postembryonale Prozesse
zu untersuchen, sollem zwei unterschiedliche RNAi-Methoden zur Anwendung
kommen: Injektionen in weibliche Puppen (parentale RNAi) zur Analyse embryonaler
Defekte in den Nachkommen der injizierten Tiere und Injektionen in weibliche Larven
(larvale RNAi) zur Auswertung von Metamorphose- und Oogenese-Defekten in den
injizierten Tieren selbst.
Für beide Injektionen wird man sich die zusätzliche Information gewebespezifi-
scher GFP-Expression (eines grün-fluoreszierendes Proteins) in „Enhancer-trap“-
Stämmen zu Nutze machen (Abb. 25). Beide verwendeten Stämme tragen als Trans-
formationsmarker ein eGFP-Gen unter der Kontrolle eines 3xP3 Promotors (Horn
und Wimmer, 2000; Lorenzen et al., 2003), der zur Expression des Markers in den
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