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I. 2. Ergebnisse Abb. 10: nanos- und pumilio-RNAi führen auch zu Kopfdefekten Epifluoreszenzaufnahmen der Kopfkutikulas schlupfreifer Larven aus ventraler oder anteroventraler Sicht. A Wildtyp. Die paarigen Antennen, Mandibeln und Maxillen, die fusionierten Labialpalpen und das Labrum sind deutlich zu erkennen. B nos RNAi Larve. Eine Antenne ist deletiert, die Labialpalpen sind zu beinähnlichen Anhängen transformiert (Pfeil) C pum RNAi Larve. Die Mandibeln sind teilweise zu einer anderen gnathalen Identität transformiert, erkennbar an einem sensorischen Feld ähnlich dem distalen Ende der Maxille (Pfeil). Sämtliche Kopfanhänge sind verkürzt. D nos/pum RNAi Larve. Antennen und Mandibeln sind deletiert, die Labialpalpen sind nicht fusioniert und zu thorakalem Chrakter transformiert, erkennbar an dem Vorhandensein einer kleinen distalen Klaue am Labialpalpus (Pfeil). Anterior ist in allen Abbildungen oben. Lr: Labrum/labrale Segmentanlage, Ant: Antenne/antennale Anlage, Oc: Okulare Segmentanlage, Md: Mandibel/mandibuläre Segmentanlage, Mx: Maxille/maxilläre Segmentanlage, Lb: Labium/labiale Segmentanlage, T: thorakale Identität 2.3.3. nanos/pumilio-Doppel-RNAi führt zu stärkeren Phänotypen 54 Auch in den Nachkommen von Tieren, denen dsRNAs komplementär zu nos und pum injiziert wurden, finden sich sowohl abdominale Defekte als auch Veränderun- gen der Kopfsegmente (Abb. 9, Abb. 10). Insofern gleichen sie den Larven in Einzel- RNAi-Experimenten. Allerdings wird schnell deutlich, dass die beobachteten Phäno- typen insgesamt stärker und höher penetrant sind (Abb. 11, Abb. 12; s. Anhang Tab. 10, Tab. 11). Das bedeutet, dass Larven, die Segmentierungsabbrüche in Kombina- tion mit Kopfdefekten zeigen, deutlich häufiger auftreten, als in der Einzel-RNAi. Während die ohnehin sensitivere Bildung der abdominalen Segmente auch in der
I. 2. Ergebnisse Doppel-RNAi in vergleichbarem Maße gestört ist (Abb. 9, D), treten die Deletionen von Kopfanhängen deutlich häufiger auf. Insgesamt zeigen 80% aller entwickelten Larven den starken Phänotyp, also die Kombination von anterioren und posterioren Defekten (Abb. 11; s. Anhang Tab. 10). Auch die beobachteten Kopfphänotypen sind dramatischer. So treten hier bei 60 % aller entwickelten Larven Deletionen der antennalen und mandibulären Segmente auf (Abb. 10, D, Abb. 12; s. Anhang Tab. 11), d.h. sie zeigen den stärksten in der Einzel-RNAi beobachtbaren Defekt. Somit kann davon ausgegangen werden, dass nanos/pumilio Doppel-RNAi dem vollständigen Funktionsverlust von nanos und pumilio näher kommen als die Einzel-RNAi- Experimente. Abb. 11: Verteilung der phänotypischen Klassen nach nanos- und pumilio-RNAi Experimenten Gezählt wurden entwickelte Larven - zu Grunde liegende Zahlen finden sich in Tab. 10. Schwache Phänotypen: Larven mit reduzierter Zahl an Abdominalsegmenten, oder Veränderungen der Mundwerkzeuge. Starke Phänotypen: Larven mit anterioren und posterioren Defekten. Unspezifische Phänotypen: Hintergrund von in unbehandelten Tieren auftretenden Defekten, Unklar: Larven die wegen Präparationsartefakten nicht auswertbar waren. Als Kontrolle wurde dsRNA komplementär zur mRNA eines fluoreszenten Proteins einer Koralle (Discosoma sp., DsRed, Clontech) in vergleichbarer Konzentration verwendet. 55
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Die Funktion von Genen der posterio
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Danke! Obwohl als letztes verfasst,
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Inhaltsverzeichnis 2.4.1. Die Segme
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Inhaltsverzeichnis 3.1.2. Die Auswe
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Summary 2 Thus, I could show that a
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II. 1. Einleitung Augen und im zent
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II. 1. Einleitung 1.4.3. Die iBeetl
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II. 2. Ergebnisse 152 Im nächsten
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II. 2. Ergebnisse von RNAi-Effekten
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II. 2. Ergebnisse diesen Phänotype
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II. 3. Diskussion nach den gleichen
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II. 4. Material und Methoden Phenol
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II. 4. Material und Methoden 218 Ti
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Allgemeine Diskussion Allgemeine Di
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Allgemeine Diskussion und Achsendet
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Anhang ACCCATCCGTACGGCTGCCGGGTCATTC
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Anhang 2. Ergänzende Ergebnisse zu
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Anhang 3. Zeitaufwand der iBeetle-A
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Anhang 5. Zusammenfassung der Ergeb
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234 134 900 14 similar to D123 (cdc
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236 77 1500 57 gene without homolog
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238 43 1000 99 similar to Rab-prote
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Anhang gemischt embryonal letal von
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Literatur Literatur Abdel-Latief, M
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Literatur Bernstein, D., Hook, B.,
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Literatur Ciglar, L. und Furlong, E
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Literatur Falciani, F., Hausdorf, B
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Literatur Gutjahr, T., Vanario-Alon
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Literatur Kiger, A. A., Baum, B., J
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Literatur Lin, H. und Spradling, A.
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Literatur binding protein that phys
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Literatur Riddiford, L. M., Hiruma,
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Literatur Schüpbach, T. und Wiesch
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Literatur Tomoyasu, Y., Miller, S.
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Literatur Zhang, X. D. und Heyse, J
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