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II. 3. Diskussion
1980). Bei der Kalkulation der Gesamtzahl letaler Gene in Drosophila mussten also
mehrere Arbeiten ausgewertet und die Ergebnisse insgesamt extrapoliert werden
(Miklos und Rubin, 1996), während der iBeetle-Screen ein direkteres und somit
möglicherweise realistischeres Bild liefern wird. Zudem muss davon ausgegangen
werden, dass die klassischen Drosophila-Mutagenese-Screens nicht vollständig
saturiert waren (Pollock und Larkin, 2004), und somit auch die Kalkulationen der
essentiellen Loci nicht akkurat sind. Die Schätzungen der Zahl der Drosophila-Loci,
die zu Letalität führen können, könnten also zu niedrig sein und zumindest einen Teil
der Differenz erklären.
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Als mögliche Erklärung aus anderer Sicht ist denkbar, dass die Zahl der zu Letali-
tät führenden Injektionen des Pilot-Screens nicht repräsentativ für den iBeetle-
Hauptscreen ist und somit der eigentliche Anteil niedriger läge. Zunächst ist offen-
sichtlich, dass die Stichprobe der 82 zufällig gewählten Klone zu klein ist, um eine
statistisch signifikante Aussage über alle Tribolium-Gene zu machen. Vor allem aber
könnte die Verwendung einer embryonalen cDNA-Bank zur Überrepräsentierung von
wichtigen Entwicklungsgenen und damit zu einem erhöhten Anteil an letalen Injektio-
nen geführt haben. Auch die schon in 3.2.1 erwähnten, noch nicht perfektionierten
Injektionen könnten diese Anzahl beeinflussen, und in einigen Fällen den Grund für
den Tod der injizierten Tiere darstellen. Allerdings ist dies nur in maximal 8 % der
Injektionen denkbar, da die restlichen Fragmente (20 %) in beiden unabhängigen
Injektionen zum Tod führten (Abb. 30) und somit höchstwahrscheinlich als spezifi-
scher Effekt der RNAi und nicht als Schwäche der Methode zu werten sind. Auch
ohne Injektion und ohne ersichtlichen Grund kommt es hin und wieder zum Tod
einzelner Käferpopulationen (J.Trauner, persönl. Mitteilung), eine Problematik, mit
der während des iBeetle-Screens gerechnet werden muss.
Eine letzte Möglichkeit, die zu einer Erhöhung der Zahl letaler Injektionen in Tri-
bolium führen könnte, ist das Auftreten von „Off-target effects“ der injizierten RNAs.
Solche sind in Tribolium zwar bisher nicht beschrieben worden, es ist aber denkbar,
dass sie häufiger vorkommen, aber wegen der relativen Seltenheit von Genen mit
starken frühembryonalen Phänotypen übersehen wurden. Der RNAi-Mechanismus
basiert auf siRNAs mit einer Länge von 21 Nukleotiden (Meister und Tuschl, 2004).
Es ist möglich, dass solche kurze, zufällig zu anderen Genen identische Abschnitte in
einigen dsRNA-Fragmenten vorkommen. Dabei ist anzunehmen, dass der Effekt
solcher kurzer Abschnitte im Vergleich zur langen Gesamt-dsRNA nicht in der Lage