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Muskelpräparate, Tag 14:
II. 2. Ergebnisse
Nach drei Tagen bei 30 °C ist der Großteil der Larven der zweitägigen zweiten
Ablage frisch geschlüpft oder kurz vor dem Schlupf. In diesem Fall werden ge-
schlüpfte und nicht geschlüpfte Larven eingebettet und das Muster der pig19-
Enhancer-Trap-Expression in der Muskulatur der Larven analysiert. Subtilere Mus-
keldefekte, z.B. der Beinmuskulatur sind möglicherweise nicht letal, weswegen alle
Tiere untersucht werden. Hierbei ist wichtig, nicht zu viel von der 72-stündigen Inku-
bation abzuweichen, da sich die Expression des Muskel-Enhancer-Traps der pig19-
Linie erst spät in der Embryonalentwicklung ausbildet, sich dieses Muster aber in
toten Embryonen schnell auflöst. Eine zu frühe oder zu späte Präparation erlaubt
also keine sinnvolle Auswertung mehr. Eine Abweichung von 12 Stunden erwies sich
hierbei bereits als zu groß.
Die Analyse der Enhancer-Trap-markierten Muskulatur erlaubt die Erfassung von
Defekten der Körper- oder der Beinmuskulatur, die protokolliert und dokumentiert
werden. Außerdem ist bei diesen Präparaten, im Gegensatz zur Kutikulapräparation,
bei der alle nicht-kutikulären Gewebe aufgelöst werden, die Unterscheidung zwi-
schen unbefruchteten bzw. unentwickelten Embryonen und embryonaler Letalität in
Keimstreifstadien möglich. Durch Fluoreszenz- oder Nomarski-Mikroskopie frischer
Präparate kann embryonales Gewebe noch vor der Sezernierung von Kutikula er-
kannt, und somit starke Defekte der Achsenbildung oder der Segmentierung detek-
tiert werden.
Während des iBeetle-Screens soll ein zusätzlicher Fluoreszenzmarker des Ner-
vensystems die Detektion neuronaler Phänotypen erlauben.
Larvale Injektionen:
Injektion, Tag 0:
Während des Pilot-Screens wurden 16 bzw. 20 Larven im sechsten (vorletzten)
Larvenstadium des mD17-Stammes (Sokoloff, 1972; Pavlopoulos et al., 2004) inji-
ziert. Im iBeetle-Screen wird ein zusätzlicher Y-Chromosom-gekoppelter Augenmar-
ker die Geschlechtertrennung der Larven erlauben, weswegen dann die Injektion von
8 - 10 weiblichen Larven ausreichend sein wird.
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