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II. 2. Ergebnisse Abb. 35: Morphologisch feststellbare Defekte der Embryonalentwicklung nach pupaler Injektion Gezeigt sind Aufnahmen der Kutikula-Autofluoreszenz von Larven nach parentaler RNAi (B - F, H) im Vergleich zum wildtypischen Phänotyp (A, G). A laterale Ansicht des Kopfes einer Wildtyp-L1-Larve. B Phänotyp nach Injektion der dsRNA zu similar to nuclear fallout (Mikrotubuli-bindendes Protein, wichtig unter anderem für adulte sensorische Vorläuferzellen in Drosopila (Abdelilah- Seyfried et al., 2000). Laterale Ansicht des Kopfes. Die distale Borste der Antenne fehlt (Pfeilspitze). C Phänotyp nach Injektion der dsRNA zu einem nicht annotierten Gen ohne bekannte Homologe. Laterale Ansicht des Kopfes. Das Borstenmuster des Kopfes ist gestört (Pfeilspitze). D Phänotyp nach Injektion der dsRNA zu einem nicht annotierten Gen ohne bekannte Homologe. Optischer Schnitt durch Kopf und Thorax. Die Kutikula der Antennen und zweier Beine ist nach innen eingestülpt. E Phänotyp nach Injektion der dsRNA zu similar to translin (DNA-bindendes Protein). Ventrale Ansicht. Anteriore Segmente fehlen, nur ein thorakales Segment (die Pfeilspitze zeigt auf ein Bein) und das Abdomen sind erkennbar. F Phänotyp nach Injektion der dsRNA zu einer vorhergesagten mRNA (Ähnlichkeit zu Protein-Tyrosin-Phosphatasen). Nur noch ein undefinierbarer Rest Kutikula und ein Stück Darm sind erkennbar. G Dorsale Ansciht einer Wildtyp-L1-Larve. E Phänotyp nach Injektion der dsRNA zu similar to glucorunyltransferase-I (wichtig für Proteoglykan-Biosynthese). Dorsale Ansicht. Das Borsten-Muster der abdominalen Segmente ist gestört (Pfeilspitze). Anterior ist in allen Abbildungen links. T1: erstes thorakales Segment, A1: erstes abdominales Segment, A8: achtes abdominales Segment 180
2.3.3. Defekte postembryonaler Prozesse II. 2. Ergebnisse Der zweite Haupt-Fokus des iBeetle-Screens liegt auf Musterbildungsprozessen während der Metamorphose, die durch larvale RNA-Injektionen untersucht werden sollen. Dieser Themenkomplex, bei dem vor allem die Entwicklung des Kopfes, der Extremitäten und der thorakalen Muskulatur von Interesse ist, ist noch weitgehend unbearbeitet. Hier werden also in besonderem Maße neue Forschungsrichtungen unterstützt. Auch die larvalen Injektionen führten zu einigen unterschiedlichen Phänotypen. Zunächst trat beispielsweise nach sechs Injektionen der Tod der injizierten Tiere in adulten Stadien auf (RNA-# 10, 20, 25, 55, 82, 89). Da diese Letalität erst deutlich nach der Injektion auftritt, ist dies wohl nicht auf essentielle Funktionen der Gene zurückzuführen, sondern auf eine spezifische Beteiligung an physiologischen Vor- gängen der adulten Tiere, die beispielsweise mit der Nahrungsaufnahme, dem adulten Stoffwechsel oder neurologischen Prozessen zusammenhängen könnten. Eine der RNAs dieser Gruppe könnte ein Beispiel sein, das die Schwächen eines großangelegten Screenings verdeutlicht. Die Injektion der dsRNA zu similar to calcineurin-B (RNA-# 10) führte im Rahmen des Pilot-Screens zu erwähnter adulter Letalität. Der Tod von drei von sieben Puppen, und die verspätete Verpuppung von vier von 16 Larven flossen dabei wegen der geringen Penetranz nicht in die Katego- risierung des Phänotyps ein. In Drosophila zeigen Mutanten des calcineurin-B-Gens Störungen der Metamorphose, die zum Tod in larvalen oder pupalen Stadien führen (Sullivan und Rubin, 2002), also den wenig penetranten Phänotypen im Screen entsprechen. Außerdem entwickeln „Escaper“ der Drosophila-Mutanten Defekte der indirekten Flugmuskulatur (Gajewski et al., 2003). Dieser Phänotyp war in unserem Screen nicht nachweisbar, möglicherweise weil in diesem Fall die RNA- Konzentration nicht ausreichend war, um Defekte zu induzieren. Natürlich ist auch denkbar, dass calcineurin-B keine konservierte Funktion in Tribolium hat, dennoch verdeutlicht dieser Zusammenhang, dass die Sensitivität eines solchen Screens zwangsläufig begrenzt ist und nicht alle Faktoren mit interessanten Funktionen detektiert werden können. Zum Tod der injizierten Tiere in etwas früheren Stadien führen Faktoren, die mit der Kontrolle des Ablaufs der Metamorphose interferieren. Die RNA mit der Nummer 51 führte zur Verlängerung der Larven-Phase, die RNAs 36 und 64 verhinderten die Puppenhäutung (Abb. 36 M) und RNA 88 führte zum Tod der Puppen. Zwischen 181
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Die Funktion von Genen der posterio
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Danke! Obwohl als letztes verfasst,
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Inhaltsverzeichnis 2.4.1. Die Segme
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Inhaltsverzeichnis 3.1.2. Die Auswe
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Summary 2 Thus, I could show that a
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Zusammenfassung praktischen Durchf
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Abbildungsverzeichnis Abb. 24: Sche
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Abkürzungen Abkürzungen 8 AS: Ami
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Allgemeine Einleitung Allgemeine Ei
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Allgemeine Einleitung Tiere, hervor
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I. Kapitel: I. 1. Einleitung Die Fu
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I. 1. Einleitung 3; Davis und Patel
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I. 1. Einleitung 1.2. Drosophila me
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I. 1. Einleitung Butler, 1988). Int
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I. 1. Einleitung zur Phosphorylieru
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I. 1. Einleitung Gene ist in Tribol
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I. 1. Einleitung Die frühe Regulat
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I. 1. Einleitung wahrscheinlich üb
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I. 1. Einleitung wie in Vertebraten
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I. 1. Einleitung und Wharton, 1999)
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I. 1. Einleitung des nanos-Verlusts
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I. 1. Einleitung Außerdem zeigen n
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1.5. Ziele des ersten Kapitels der
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2. Ergebnisse I. 2. Ergebnisse 2.1.
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I. 2. Ergebnisse Abb. 6: Sequenzver
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I. 2. Ergebnisse Domäne vermittelt
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2.2.2. nanos-Expression ist nur in
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I. 2. Ergebnisse einerseits, dass d
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I. 2. Ergebnisse Doppel-RNAi in ver
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I. 2. Ergebnisse Expression auf die
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I. 2. Ergebnisse 2.7. Die Beteiligu
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Abb. 19: brain-tumor-RNAi führt zu
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3. Diskussion I. 3. Diskussion 3.1.
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4. Material und Methoden I. 4. Mate
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Anhang gemischt embryonal letal von
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Literatur Literatur Abdel-Latief, M
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Literatur Bernstein, D., Hook, B.,
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Literatur Ciglar, L. und Furlong, E
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Literatur Falciani, F., Hausdorf, B
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Literatur Gutjahr, T., Vanario-Alon
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Literatur Kiger, A. A., Baum, B., J
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Literatur Lin, H. und Spradling, A.
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Literatur binding protein that phys
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Literatur Riddiford, L. M., Hiruma,
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Literatur Schüpbach, T. und Wiesch
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Literatur Tomoyasu, Y., Miller, S.
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Literatur Zhang, X. D. und Heyse, J
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