Dokument 1.pdf - OPUS - Friedrich-Alexander-Universität Erlangen ...

I. 2. Ergebnisse
2.3. pRNAi für nanos und pumilio führt zu Veränderungen der
larvalen Morphologie
Für funktionelle Studien in Tribolium steht die ausgeprägte systemische RNA-
Interferenz-Antwort als sehr effektives Werkzeug zur Verfügung (Brown et al., 1999b;
Bucher et al., 2002; Tomoyasu und Denell, 2004; Arakane et al., 2008). Ein für die
Praxis wesentlicher Vorteil der systemischen RNAi ist die Möglichkeit der parentalen
RNAi, bei der weibliche Puppen mit doppelsträngiger RNA (dsRNA) injiziert werden
(pRNAi). Der RNAi-„knock-down“-Effekt wird so auch in deren Nachkommen indu-
ziert und erlaubt die Untersuchung der Auswirkungen auf die embryonale Musterbil-
dung. Diese Nachkommen werde ich zur Vereinfachung im Folgenden RNAi-Larven
oder -Embryonen nennen. Die parentale RNAi wurde hier genutzt, um die Expressi-
onsniveaus der nanos und/oder pumilio-mRNAs während der Embryonalentwicklung
zu reduzieren und aus den daraus resultierenden Defekten auf ihre Funktion zu
schließen. Diese Defekte lassen sich in den meisten Fällen gut anhand der Morpho-
logie der schlupfreifen Larve analysieren. Die Kutikula der schlupfreifen Larve (Abb.
9, A) spiegelt die Morphologie des Tieres exakt wieder und erlaubt die Differenzie-
rung vieler einzelner Körperbereiche. Deutlich zu erkennen ist die Gliederung in Kopf
(Caput), den Thorax mit seinen drei Beinpaaren und das Abdomen. Am Kopf lassen
sich die Mundwerkzeuge und andere Kopfanhänge gut erkennen. Auf die anteriorste
Struktur, das Labrum, folgen die paarigen Antennen, Mandibeln und Maxillen, sowie
das sekundär fusionierte Labium, das den Präoralraum um die Mundöffnung nach
ventral abschließt (Abb. 10, A). Der Prothorax ist etwas länger als die beiden ande-
ren thorakalen Segmente, und der Mesothorax trägt ein laterales Paar Stigmen (Abb.
9, A). Die abdominalen Segmente 1 bis 8 tragen je ein Paar laterale Stigmen und
sind kaum voneinander zu unterscheiden. Die beiden letzten abdominalen Segmente
(9 und 10) fusionieren mit dem Telson und bilden eine terminale Struktur mit dorsa-
len, vom neunten Abdominalsegment abgeleiteten, Urogomphi und ventral liegenden
Nachschiebebeinchen, den Pygopodien, die als Anhänge des zehnten Abdominal-
segments gelten (Abb. 9, A; Sokoloff, 1972).
49