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II. 4. Material und Methoden
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Empfehlung: Die Dokumentation des (mit Beschriftung versehenen) Reifungs-
blocks mit einer einfachen Digitalkamera dient als Sicherheit und erlaubt im Notfall
die nachträgliche Kontrolle der Ablagemenge.
Bei deutlich verminderter Legeleistung werden pro betreffenden Ansatz 4 Weib-
chen auf das Vorhandensein eines unspezifischen „held-egg“-Phänotyps getestet
(Ovarpräparation).
egg“)
! Festhalten und Dokumentation potentieller Oogenese-Phänotypen (kein „held
Ovarpräparation (Rechtshänder): Käfer mit linker Dumont-Pinzette fest an T2
greifen, dabei öffnen sich die Elytren. Mit rechter Pinzette an den letzten beiden
Abdominalsegmenten fassen und halten. Mit linker Pinzette loslassen und den Käfer
dann nach dorsal klappen, bis die ventrale Epidermis und Kutikula aufreißt. Nun mit
links anterior festhalten (z.B. mit geöffneter Pinzette von dorsal auf beiden Seiten so
lateral wie möglich im Bereich des Thorax bzw. des anterioren Abdomens den Käfer
auf die Unterlage drücken) und mit rechts in einer flüssigen Bewegung die letzten
beiden Abdominalsegmente wegziehen. Dabei sollte im Idealfall das vollständige
Ovar mit aus der Karkasse gezogen werden. Dies erfordert Übung!
7) Kutikulapräparate herstellen (Tag 13)
! Menge der geschlüpften Larven festhalten (0, -, +, ++)
Verbleibende Eier in flaches (0,7 cm) Blöckchen (180 !m) transferieren. Vorsicht,
um die Orientierung zu behalten muss zweimal umgeschüttet werden! Die Eier 2 x 3
min in 50% Klorix dechorionisieren, dabei durch auf und ab Bewegen aus der Flüs-
sigkeit heraus möglichst viel Mehl wegwaschen. Danach mit Wasser aus einer
Spritzflasche spülen, dabei am besten von unten Kontakt zur Beckenkante halten,
damit das Wasser abläuft und sich nicht im „Well“ sammelt („Überlaufgefahr“).
An einem Stereomikroskop mit ausreichend Arbeitsabstand mit einem Pinsel die
Eier aus dem „Well“ in ca. 70 !l Hoyers Medium/Milchsäure (1:1) übertragen. Vorher
das „Well“ auf ein Tuch trockentupfen und zur Orientierung markieren. Ca. 2/3 der
Eier eines Geleges als Quetschpräparat. Dabei mit einem stumpfen Gegenstand an
mehreren Stellen vorsichtig Druck auf das Deckglas ausüben, bis die Eihüllen auf-
platzen. 1/3 ungequetscht auf dem gleichen OT einbetten.