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II. 3. Diskussion
in Tribolium, nicht aber in Drosophila für die Segmentierung benötigt wird (Galindo et
al., 2007).
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Vor allem die beiden letzten Gen-Gruppen zeigen, dass iBeetle in der Lage sein
wird wichtige Entwicklungsgene zu identifizieren, die nicht bereits in den zahlreichen
Drosophila-Screens entdeckt wurden, und demonstrieren damit den großen Nutzen,
den iBeetle für die Insekten-Entwicklungsbiologie haben wird.
Trotz seiner insgesamt hohen Effizienz gibt es eine Einschränkung, die iBeetle
mit vielen anderen Screens teilt, nämlich das Prinzip der Detektion des frühesten
Phänotyps (St Johnston, 2002). Das bedeutet, dass beispielsweise letale Defekte der
Embryonalentwicklung in genetischen Screens die Beobachtung späterer Phänoty-
pen verhindern. In iBeetle wird dieser Effekt abgeschwächt, indem durch die pupalen
und larvalen Injektionen zwei Screens kombiniert werden. Nichtsdestotrotz können
Fragmente, deren larvale Injektion zu Letalität während der Metamorphose oder
früher führt, nicht mehr auf ihre Rolle für die Funktion der Stinkdrüsen untersucht
werden, was im Sinne der ökonomischen Durchführung des Screens akzeptiert
werden muss. Ein ähnliches Problem tritt auch im pupalen Screenteil auf. Führt die
Injektion zum Tod der injizierten Tiere, ist also ein essentielles, ein „house keeping“-
Gen betroffen, oder ruft die RNAi einen Oogenese-Defekt hervor, so können keine
Embryonen zur Auswertung gesammelt werden. Im Rahmen des Pilot-Screens
führten 20 Injektionen zu Letalität, sechs zu einem Ovarphänotyp und fünf zu einem
Eiablagehemmungsphänotyp („held egg“) und konnten somit nicht auf ihren embryo-
nalen Phänotyp hin überprüft werden. Diese Einschränkung könnte nur durch zusätz-
liche embryonale Injektionen (Brown et al., 1999b) vollständig umgangen werden,
was wegen des sehr hohen Aufwands im Rahmen von iBeetle nicht möglich ist.
Während der Planungsphase wurde der Einsatz von adulten dsRNA-Injektionen
als Alternative diskutiert, die möglicherweise weniger häufig zu reduzierter Legeleis-
tung der injizierten Tiere führt (van der Zee et al., 2006). Obwohl dies möglicherweise
z.B. die Zahl der „held egg“-Phänotypen reduzieren würde, wurde diese Alternative
aus mehreren Gründen als nicht sinnvoll verworfen: 1. RNAi gegen essentielle Gene
führt vermutlich auch nach adulter Injektion zu Letalität. 2. Adulte RNAi führt im
Allgemeinen zu schwächeren embryonalen Phänotypen (nicht gezeigt, Erfahrungen
der Labore Klingler, Schoppmeier). 3. Adulte RNAi führt erst mehrere Tage nach
Injektion zu den maximalen RNAi-Effekten und scheint weniger lange anzuhalten als
pupale RNAi. Dabei ist fraglich, ob der Zeitpunkt der maximalen Effizienz für unter-